총 단 백 질
(Total Protein)
1.생리적 의의
1)총단백질 (Total Protein)의 생리적 역할
⑴영양원
⑵삼투압 유지
⑶물질운반 작용
⑷혈액 pH의 유지 : 산염기 평형 유지 , 완충 작용
⑸면역 작용 : 항체 작용
⑹혈액응고 작용
⑺효소반응 작용 : 촉매 작용
⑻호흡 작용 : CO2의 운반
2)Total Protein은 끊임없이 합성 , 붕괴 , 체내분포 , 체외로의 누출의 네가지 기본인자에 의해 규정되고
동적 평형을 유지하고 있다
2.총단백질 (Total Protein)
; 일반적으로 Total Protein = Albumin + Globulin 을 의미한다
1)Serum Protein
⑴Albumin
⑵Globulin
2)Plasma Protein
⑴Fibrinogen
3.채혈조건
1)식사와 상관없다
2)체위나 운동에 의해 변동한다
3)서 있을 때가 누워 있을 때보다 0.4～0.8g/㎗ 높게 나온다
4)단시간에 심한 운동은 총단백질 농도를 6～12% 증가 시킨다
4.정상치 : 6.5～8.5g/㎗
5.임상적 의의
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고단백질 혈증 (10～16g/㎗) (Hyperproteinemia) |
저단백질 혈증 (4.0g/㎗ 이하) (Hypoproteinemia) |
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주로 Immunoglobulin 증가 다발성 골수종 (Multiple Myeloma) Macroglobulin 혈증 고 Globulin 혈증 종양 림프성 망내증 특수한 원충 감염증 (Malaria) |
주로 Albumin 부족 단백질 공급부족 : 소화기계 질환 , 기아 , 영양부족 단백질 합성장애 : 간기능 이상 , 간염 , Hyperglobulin 단백질 분해항진 : 갑상선 기능항진 , 당뇨병 , 발열 단백질 배설이상 : 신우염 (Nepritis) , 장관의 누출 , 화상 |
※단, Albumin 증가는 탈수현상으로 증가하는 것 처럼 보인다
6.Total Protein 측정법
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측정방법 |
적 정 법 |
비 색 법 |
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Micro Kjeldahl 법 (질소 정량법) |
Biuret 법 | |
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원리 |
단백질의 질소함유율이 거의 일정한 것을 이용해서 질소를 측정한 후 계수 6.25를 곱해서 단백질의 양을 구한다 |
단백용액을 알카리용액에서 Cu+2로 처리하면 Chelate Complex가 생기는데 이와 유사한 반응이 유기화합물질인 Biuret과 Cu+2 사이에 일어나기 때문에 Biuret 반응이라 하며 이반응은 Amino acid나 Dipepide하고는 반응치 않으며 Tripolypeptide 이상에서 반응을 해서 Reddish pink Color를 낸다 |
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①1단계 : 산화 Protein + H2SO4 → (NH4)HSO4 ↑ Boiling , 산화 ②2단계 : 증류 (NH4)HSO4 + NaOH → NH3 ↑ Alkali , 증류 ③3단계 : 포집 NH3 + H3BO3 → NH4H2BO3 → NH4+ + H2BO3- ④4단계 : 적정 NH4+에 Methyl red를 가하면 Red Color로 변한다 여기에 HCl을 가하여 Red Color가 소실될 때 까지 적정한다 (적정량을 측정한다) |
①1단계 : Biuret 반응 Alkali 용액 하에서 (NaOH) Protein + Biuret 시약 → Violet Complex (청자색의 복합체 형성) ②2단계 : Salting Out (염석) Violet Complex + Sod. sulfate-sulfite → Globulin 침전 ③3단계 : 원심분리 2단계 까지의 용액에 Ether를 첨가하여 원심분리 하면 상층 : Ether , 중간층 : Globulin , 아래층 : Albumin 으로 분포한다 ④4단계 ⓐPipette으로 Albumin층을 취하여 측정 ⓑTotal Protein은 Violet Complex에 Sod. sulfite를 첨가하여 20분 방치 후 측정 | |
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시약 |
①H2SO4 : 산화제 , Kjeldahl Flask 사용 ②NaOH : (NH4)HSO4를 증류하여 NH3를 유리 ③H3BO3 : NH3를 포집 ④Methyl red : 지시약 ⑤HCl : 최종 적정시약 |
①Biuret 시약 - NaOH : pH 조절 KI : 환원제 CuSO4 : 정색시약 Rochelle salt (Na. K. tartrate) : 안정제 ②Salting Out 시약의 종류 : γ-Globulin을 제외한 Globulin 침전시약 ⓐSodium sulfate-sulfite (농도 22～28%) ⓑSodium sulfite (Na2SO3) ⓒSodium sulfate ⓓAmmonium sulfate ③Ether : Globulin과 Albumin의 분리 촉진제 ④Versatol : 표준액 |
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파장 |
無 |
540㎚ |
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특징 |
①정확도, 정밀도가 가장 좋다 ②실제 측정한 것은 Protein Nitrogen (PN)이다 ③Protein Nitrogen을 측정하여 Total Protein를 구한다 * 혈청내에 총질소 = 단백질소 (PN) + 비단백질소 (NPN) * Total Protein내에는 단백질소 (PN)가 16% 존재한다 그러므로 Total Protein : PN = 100% : 16% 따라서 Total Protein = PN × 6.25 |
①Globulin의 침전이 불완전하면 Albumin 측정치 가 상승한다 ②Salting Out (염석) ; 단백용액에 높은 농도의 염을 가하면 단백질이 물과 친화력을 잃고 단백분자 상호간에 결합에 의해 침전되는 현상 ③현재 자동 분석기에 가장 많이 사용 |
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기타 |
위의 방법이외의 Total Protein 측정법 ①굴절계법 (Refractometry 법) : TS Meter 법 , 단백의 농도가 높은 혈청 , 삼출액을 이용 ②침전법 : 단백질을 Sulfosalicylic acid 또는 TCA로 침전시켜 , 투과도와 흡광도 이용 , 660㎚로 측정 ③Lowry 법 : Folin-Ciocalteu 법 , 가장 예민한 방법 , 50㎍/㎖ 까지 측정가능 ④자외부법 (UV 법) : 280㎚에서 측정 | |
※(NH4)HSO4 : Ammonium sulfate ※H3BO3 : Boric acid (붕산) ※PN : Protein Nitrogen (단백질소)
※NPN : Non Protein Nitrogen (비단백질소) ※Na. K. tartrate : Sodium Potassium tartrate
※TCA : Trichloroacetic acid
출처 : 안산중앙병원 진단검사의학과