* IMViC Test 결과
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| 성 상 | 균 종 |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| + + - - | E. coli, Shigella ( α + - - ), Vibrio |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| - - + + | Klebsiella, Entrobacter, Hafnia, Serratia |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| - + - + | Salmonella, Arizona, Citrobacter |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| - + - - | S. typhi, S. paratyphi, Sh. sonnei, Yersinia |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| + + - α | Proteus vulgris |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| - + α α | Proteus mirabilis |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| - - - + | Pseudomonas |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
# KIA Test 결과
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| KIA 성 상 | 균 종 |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| A / A G | Klebsiella, E. coli, Hafnia, Enterobacter |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| A / AG . H2S | Arizona, Citrobacter |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| K / A | Shigella, Vibrio, Serratia, Yersinia |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| K / AG | S. Paratyphi A → Lysine 탈탄산 ( - ) |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| K / AG . H2S | S. Paratyphi B, C, Proteus, Edwarsiella |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| K / A . H2S | S. Typhi |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| K / K | Pseudomonas ( 비발효 간균 ) |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
* H2S (+) : Proteus, Edwarsiella, Citrobacter, Arizona
----------------------------------------------------------------------------------------------
----------------------------------------------------------------------------------------------
* E. coli
- K/A : A / A G
-----------------------------------------------------------------------------------------------
* Pseudo. aeruginosa : G (-) Bacilli 호기성 포도당 비발효균, 극단모균
# IMViC : - - - +
Ղ - hemolysis
Motility ( + )
KIA : K / K
색소 생성 : 녹색
Oxidase ( + )
Swarming 현상 : Old culture 시
-----------------------------------------------------------------------------------------------
* Yeast - Like Fungus
# Candida - 증식법 : Blastospore, Chlamydospore
# G (+)
# 병원성 ( Candida albicans )
# 가성균사 ( Pseudohyphae ) 생성 → Sabouraud dextrose agar에서 형성×.
# C. albicans 동정 - Corn Meal Agar
후막포자 ( Chlamydospore ) 형성 - Chlamydospore Agar
혈청내에서 Germ Tube 형성.
# Cryptococcus neoformans ( 수막염 )
- 분아에 의해서 증식된다. 균사 ( Hyphae ) 는 만들지 않는다.
+- CSF 에서 India Ink ( 묵즙표본 ) 으로 검경 → Capsule ( 무색 ) 관찰.
+- 0.1 % Toluidine Blue + CSF ( = Metachromatic 하게 염색된다.)
+- Negative Stain ( 음화염색 ) : Capsule ( 협막은 무색, 배경은 검정 )
- Capsule Stain 의 종류 : Hiss Stain, Mac Neal Stain, Lowson Stain 등
-------------------------------------------------------------------------------------------------
# Legionella pneumophilia ( 재향군인병균 )
- 배 양 : B - CYE 배지
- legionella 세균이 일으키는 감염 모두를 legionellosis 라고 부른다.
: 폐렴인 재향군인병 뿐 아니라 Pontiac fever 도 일으킨다.
-------------------------------------------------------------------------------------------------
----------------------------------------------------------------------------------------------
* V. cholera : V.parahemolyticus 와의 차이점 - 호염기성, 여름에 rice-water like stool specime
G (-), 단모성, 운동성 (+) , K / A
증균배지 : Alkaline Peptone water
선택배지 : TCBS (Thiosulfate, Citrate, Bile Salt, Sucrose) - 지시약 : BTB
→ 배지색 : Green ------------------→ Yellow --+- Cholera (+)
Sucrose 발효 +- Para (-)
0.5 % Sodium desoxycholate → string (+)
--------------------------------------------------------------------------------------
* Salmonella 와 Citrobacter 의 생화학적 성상의 차이점.
+-------------+--------------+---------------+------------+-------+-------+
| 구 분 | IMViC Test | TSI ( KIA ) | Motility | LIA | KCN |
+-------------+--------------+---------------+------------+-------+-------+
| Salmonella | - + - + | K / AGS | + | + | - |
+-------------+--------------+---------------+------------+-------+-------+
| Citrobacter | - + - + | d / AGS | + | - | + |
+-------------+--------------+---------------+------------+-------+-------+
# KCN ( 시안화 칼륨 ) 감수성 시험
- 목 적 : Citrobacter ( Paracolon ) 속과 Salmonella 속 감별에 중요하다.
No Growth ( - ) : E. coli, Shigella, Salmonella 속
# LIA ( Lisine Iron Agar ) Test
① Lysine Decarboxylase (+) ② Lysine Decarboxylase (-)
| -+---- Slant : Violet | -+---- Slant : Violet
| -+---- Butt : Violet | -+---- Butt : Yellow
( Salmonella 속 ) ( Citrobacter 속 )
# 장내세균중 운동성이 없는균 : Sal. gallinarum, Shigella 균속, Klebsiella 균속.
-----------------------------------------------------------------------------------------------
# Mycobacterium tuberculosis
# 동정순서 : AFB stain - 집균 - 배양 - Niacin
# 형 태 : Gram (+) bacilli, 절대 호기성균, Motility (-)
# Stain : Ziehl - Neelson 에 쓰이는 시약은 ?
carbolfusin , alcohol , HCl , Methylene blue
# Niacin 시험 - 인형 결핵균 ( M . tuberculosis ) 만 양성 - 황색
# 객담 전처리용 약제 : 객담 소화, 잡균억제, 균등화
- 4 % NaOH or KOH
-----------------------------------------------------------------------------------------------
-----------------------------------------------------------------------------------------------
# 색소 생성능 Test ( 비정형 Mycobacterium )
① Group Ⅰ → Photochromatic ( 광 발색균, Yellow ) : M. kansani, M. marinum
- 광이 있어야만 색소형성.
② Group Ⅱ → Scotochromatic ( 암 발색균, Yellow ) : M. scrofulaceum, M. szulgi
- 암소, 광소에서 모두 색소형성.
③ Group Ⅲ → Non - Chromatic ( 비발색균 ) : M. intracellular, M. avium
- 색소를 생성치 않는다.
④ Group Ⅳ → 신속 발육균 ( 7 일 이내 ) : M. fortuitum
⑤ Not Group → M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum
# Ogawa media ( Tb 배양 - 간헐멸균 )
1) Glycerin : 인형 결핵균 증식, 우형 결핵균 증식억제
2) Malachite green : 보통세균 억제
-----------------------------------------------------------------------------------------------
* Corynebacterium diphtheria
# Metachromatic Granule ( 이염소체 ) Stain ( = Babes - Ernst Body )
# 형 태 : Gram (+) bacilli , Motility (-) , capsul (-) 아포가 없다.
# Albert's Stain ( 이염소체 염색법 )
- 판 정 : 디프테리아 균의 과립은 까맣게, 세포질은 연록색으로 염색된다.
# 특수 배지
- Pot. tellurite → black Colony
- Löeffler's serum agar → Cream Colony
# 최종동정 : 독소생성 시험 ( Eleck method ) → 독소 항독소 침강반응 ( 면상반응 )
- Shick test ( Diphtheria 면역상태 검사 )
# Exotoxin ( 체외독소 )
# Loeffler Methylene blue simple Stain
# Metachromatic granule ( = Bobes - Ernst body ) : 이염소체 염색 → 아령모양
① Methylene blue Simple Stain
② Albert Stain : 이염소체 ( Dark blue ), Band ( 청색 또는 청녹색 ),
세포형질 ( 연한녹색 )
③ Neisseria Stain
④ Ljubinsky Stain
-------------------------------------------------------------------------------------------------
# Genus Klebsiella ( - - + + ) ( A/AG )
1. Klebsiella pneumoniae ( = Friedlander Bacillus ) = 폐렴간균
2. 운동성 (-), Lactose (+), Urea (+) 서서히 분해, Capsule (+)
3. Streptococcus pneumoniae 가 95 %, 폐렴간균이 3 - 5 % 로 폐렴간균이 원인균이다.
4. Blood Agar 에서 점액 ( String Test ) 을 생산한다.
------------------------------------------------------------------------------------------------
------------------------------------------------------------------------------------------------
* Streptococcus pneumonia
: Optochin, Bile, Inulin, 협막 팽화 시험
# Lancet diplococci shape ( 쌍을 이루고 있다. ) - Gram (+) 쌍구균, capsule
# 배 양 성 상 - 물방울 같고 점조성인 집락
- α - Hemolysis ( Hb 의 Heme 성분이 유리되어 생성 ) 로 Green Color
# 배지에서 자가용해 ( Autolysis ) 를 하므로, 집락은 시간이 경과되면 중앙이 함몰된다.
# Neufield - Quellung test ( 협막 팽화 시험 ) → 최종 동정법
# CRP ( C - Reactive Protein ) test
# 상기도에 상주하는 균
# Optochin ( ethylhydrocuprein : EHC ) S. pneumonia 억제
# Bile Solubility Test ( Bile 용해시험 )
- 목 적 : Pneumococcus (+) 와 Viridans Group (-) 와의 구별
-------------------------------------------------------------------------------------------------
# Streptococcus pyogenes ( Group A, 화농성 연쇄상 구균, β, Bacitracin )
* Antistreptolysin O Titer ( = ASLO Titer )
- Streptolysin 은 사람과 토끼의 적혈구를 용혈시키는 효소이다.
+- Ag ( Streptolysin O ) + Ab ( Serum ) + RBC = Hemolysis ( 항체 X )
+- Ag ( Streptolysin O ) + Ab ( Serum ) + RBC = Non - Hemolysis ( 항체 O )
- 목 적 : Group A 가 생성 ( Rheumatic Fever 진단시 이용. → 여성 환자에게 많다.)
- 판 정 : (+) → 166 Todd Unit
--------------------------------------------------------------------------------------------------
* Shigella
- IMViC ( d + - - ), TSI K/A, Motility (-)
- Shi. dysenteriae 의 최종동정 : mouse 복강 접종. 혈청학적 검사
--------------------------------------------------------------------------------------------------
# Clostridium : G (+) bacillus 혐기성 - Spore 형성균
- Terminal spore : Clostridium tetani → 혐기성균
- 인체 병원성 세균중 아포를 형성하는 균군은 Bacillus 균속과 Clostridium 균속이다.
- 호기성 Spore 형성균 : Bacillus
혐기성 Spore 형성균 : Clostridium
- Swarming 현상 ( Clostridium tetani : 약함 )
----------------------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------------------------
# M. leprae ( = Hansen's bacilli )
- 나병의 원인균, 인공배양이 안된다.
--------------------------------------------------------------------------------------------------
* Genus Proteus ( 부패균 = 변형균 )
# G (-) 간균 , 주모성 편모 ( 운동성 + )
# TSI ( = KIA ) K/AGS, Urea (+), Phenylalanin deaminase : PPA (+), Lactose (-)
+----------------+---------------+-----------+----------------+-------------+
| 구 분 | IMViC Test | Indole | Methyl - Red | Ornithine |
+----------------+---------------+-----------+----------------+-------------+
| P. vulgaris | + + - - | + | + | - |
+----------------+---------------+-----------+----------------+-------------+
| P. mirabilis | - + - + | - | + | + |
+----------------+---------------+-----------+----------------+-------------+
(?) * Mac, desoxylcholate agar : 독립된 무색 집락
# Weil - Felix Reaction ( 비특이적 반응 )
- P. vulgaris 항원과 리케치아의 공통항원을 이용한것.
+- OX - k : 양충병 ( R. Tsutsugamushi )
+- OX - 19 : 발진티푸스, 발진열.
+- OX - 2 : 발진티푸스, 발진열
# Urea media : Proteus 동정에 특이적 - 여과멸균
# PPA Reaction - PPA 반응은 Phenyl Alanine Agar - Deamination
* PPA 란 Phenyl Pyruvic Acid 이고, IPA 란 Indole Pyruvic Acid 의 약자이다.
# 파상발육 억제물질 : Trimethoprim, Chloral hydrate, Sulfathiazol, Sod. azide,
Alcohol 농도를 강하게, Agar 농도를 강하게 , NaCl 제거, Medium 의 수분제거 등.
파상발육 물질 : Sod. Chloride (?)
# 기타 균주
- Proteus morganii : K/AG, 식중독의 원인균.
--------------------------------------------------------------------------------------------------
# Coliform bacilli --+- 1) Escherichia coli ( E. coli )
+- 2) Citrobacter freundii
+- 3) Klebsiella pneumoniae
+- 4) Enterobacter aerogenes
# Enterobacter aerogenes ( A/AG )
- Lactose (+), 운동성 (+) 로 Klebsiella 와 감별된다.
- K. pneumoniae : 운동성 (-), OD (-)
--------------------------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------------------------
# Neisseria meningococcus : Kidney shape diplococci
+-------------------+--------+---------+---------+---------+-----------------------------+
| Species | 병원성 | Oxidase | Glucose | Maltose | 검 체 |
+-------------------+--------+---------+---------+---------+-----------------------------+
| N. gonorrhoeae | 임 질 | + | + | - | 관절액, 요, ( Synovial fluid ) |
+-------------------+--------+---------+---------+---------+-----------------------------+
| N. meningitidis | 수막염 | + | + | + | sucrose (-) C. S. F |
+-------------------+--------+---------+---------+---------+-----------------------------+
* 임균과 수막염균을 제외한 Neisseria 는 구강내의 상재균을 형성 ( 비병원성 )
* 배 양 : 호기성 ( 5 - 10 % CO2 요구 → Candle Jar )
* Chocolate agar 에 배양한 후두 가검물로 G(-) , Oxidase (+) 으로 나타나면 ? ('88 국시)
- Neisseria meningitidis
* 임균과 수막염균의 증균배지 : Thayer - Martin VCN : 증균배지
CTA ( Cystin Trypicase Agar ) : 당분해 배지
# Neisseria 속 감별에 이용되는 Oxidase Test
1) 1 % P - Aminodimethylaniline monohydrochloride 수용액을 집락에 몇방울 적하하여
색의변화 관찰. ( Tetramethyl - P - phenylene dianine HCl )
2) 양성일때는 Pink 색 → 적자색 → 흑색으로 변한다.
* Pink Color 는 균이 살아있는 상태이고, Black Color 는 균이 죽은상태이다.
3) Oxidase (+) 균 : Neisseria, Pseudomonas
--------------------------------------------------------------------------------------------------
* Haemophilus
- 가토혈액을 사용하는 것이 가장 좋다.
# Haemophilus influenzae → H - I Test
- G (-) 소간균, Spore (-), Capsule (+)
- 배 양 --+- 보통 한천배지에서 발육하지 않는다.
| ( 혈액한천, Chocolate 한천 사용 ) → 5 - 10 % CO2 요구.
+- 발육소 : X 인자 ( 내열성 ), V 인자 ( 이열성 ) 필요.
+- Satellitism 현상 ( 위성현상 ) : 포도상구균 집락에 커다란 집락 형성.
- 수막염의 원인균, 상기도 상재균
- X, V 인자 요구, Porphyrin 시험 - 음성,
# H. ducreyi ( 연성하감균 )
- X 인자를 필요로 한다.
----------------------------------------------------------------------------------------------
----------------------------------------------------------------------------------------------
* Urea (+) : M. morganii , C. neoformans , K. pneumoniae
* Negri 소체 - Rabies virus
* 고압 증기 멸균 ( Autoclave )
- 121 ℃ ( 250 ℉ ) / 15 lb / 15 - 20 min → Spore 멸균에 가장좋다.
* Stuart's Transport Medium - 면봉으로 직접 채취한 경우
* Littman India Ink ( 묵즙검경 ) : Capsule 형성균 관찰 → Crytococcus
Lactophenol Cotton Blue Stain : permatophytes 관찰
* Candle Jar
# 호기성 및 혐기성 세균의 여러 균종이 CO2 가 있어야 증식되거나 더 잘 증식된다.
# 혐기성 배양방법이 아니다.
* 혐기성균 배양법
- Gas 치환법, Gas Pak ( 촉매법 ), Steel Wool 법, Pyrogallol 법 등이 있다.
↳ 지시약 : Methylene blue - 무색 ( O2 침입 시 blue )
* 즉시 접종이 불가능할 경우 - Buffered Glycerol Saline
* Capsule 형성균 : Klebsiella pneumoniae, Strepto pneumoniae, Clostridium perfringens,
Neisseria, Bacillus anthracis ( 탄저균 ), Cryptococcus neoformans,
Bordetella pertusis ( 백일해 ) 등.
* 무아포균 : H. influenzae, B. pertusis, C. diphtheria
* 수막염 원인균
- N. meningitidis, Cryptococcus neoformance, H. influenza, S. pneumoniae, Listeria
* Brom thymol blue ( 6.0 - 7.6 ) : Yellow(acid) Blue(alk) - Simmon citrat agar, O-F, TCBS
* Staphylococcus No. 110 배지 ( 선택, 감별배지 )
- Gelatin ( 3 % ), Mannitol ( 1 % ), NaCl ( 7.5 % )
* S. aureus 의 역학조사 : Phage Typing
* 색소 생성균 - Serratia ( Red ), S. Albus ( White ), S. aureus ( Gold yellow ),
S. citreus ( Yellow ), Pseudomonas ( Green ), Sarcina ( 등색 ) 등.
* 진균의 현미경적 관찰
- 10 % KOH : 각질, 손톱, 피부는 용해되나 Yeast, Hyphae 는 그대로 남는다.
- Yeast, Fungi 의 현미경적 관찰시 염색 : Lacto phenol cotton blue 염색
* Thioglycollate : 혐기성균 배양. ( 실온보관, 호기성균도 잘자랄수 있다.) → Yersinia (22℃ 발육)
* Voges - Proskauer ( VP ) Reaction → Broth
포도당에서 Acethyl-Methyl Carbinol ( = Acetoin ) 생성하면 VP 시약과 반응하여
---、 Butylene Glycol ( 적색 )
* 사상형 진균 ( Mycelium like fungi ) - 균사체 ( Mycelium )
- 종류 : Rhizopus : 격벽 ( Septum )
* Slide culture : 생식균사와 영양균사의 형태를 자연상태로 관찰할 수 있다.
* Amino acid ' Decarboxlase Test ' ( 아미노산 탈탄산 시험 )
- Result : Violet → Yellow → Violet 으로 변하면 양성
* Gram (-) 억제 : Chloral hydrate, Pot. tellurite ( 파상풍 발육억제 ), Sod. azide,
ex) Proteus Phenyl ethyl alcohol ( PEA ) 등
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| 성 상 | 균 종 |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| + + - - | E. coli, Shigella ( α + - - ), Vibrio |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| - - + + | Klebsiella, Entrobacter, Hafnia, Serratia |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| - + - + | Salmonella, Arizona, Citrobacter |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| - + - - | S. typhi, S. paratyphi, Sh. sonnei, Yersinia |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| + + - α | Proteus vulgris |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| - + α α | Proteus mirabilis |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| - - - + | Pseudomonas |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
# KIA Test 결과
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| KIA 성 상 | 균 종 |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| A / A G | Klebsiella, E. coli, Hafnia, Enterobacter |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| A / AG . H2S | Arizona, Citrobacter |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| K / A | Shigella, Vibrio, Serratia, Yersinia |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| K / AG | S. Paratyphi A → Lysine 탈탄산 ( - ) |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| K / AG . H2S | S. Paratyphi B, C, Proteus, Edwarsiella |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| K / A . H2S | S. Typhi |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
| K / K | Pseudomonas ( 비발효 간균 ) |
+-----------------------+----------------------------------------------------------------+
* H2S (+) : Proteus, Edwarsiella, Citrobacter, Arizona
----------------------------------------------------------------------------------------------
----------------------------------------------------------------------------------------------
* E. coli
- K/A : A / A G
-----------------------------------------------------------------------------------------------
* Pseudo. aeruginosa : G (-) Bacilli 호기성 포도당 비발효균, 극단모균
# IMViC : - - - +
Ղ - hemolysis
Motility ( + )
KIA : K / K
색소 생성 : 녹색
Oxidase ( + )
Swarming 현상 : Old culture 시
-----------------------------------------------------------------------------------------------
* Yeast - Like Fungus
# Candida - 증식법 : Blastospore, Chlamydospore
# G (+)
# 병원성 ( Candida albicans )
# 가성균사 ( Pseudohyphae ) 생성 → Sabouraud dextrose agar에서 형성×.
# C. albicans 동정 - Corn Meal Agar
후막포자 ( Chlamydospore ) 형성 - Chlamydospore Agar
혈청내에서 Germ Tube 형성.
# Cryptococcus neoformans ( 수막염 )
- 분아에 의해서 증식된다. 균사 ( Hyphae ) 는 만들지 않는다.
+- CSF 에서 India Ink ( 묵즙표본 ) 으로 검경 → Capsule ( 무색 ) 관찰.
+- 0.1 % Toluidine Blue + CSF ( = Metachromatic 하게 염색된다.)
+- Negative Stain ( 음화염색 ) : Capsule ( 협막은 무색, 배경은 검정 )
- Capsule Stain 의 종류 : Hiss Stain, Mac Neal Stain, Lowson Stain 등
-------------------------------------------------------------------------------------------------
# Legionella pneumophilia ( 재향군인병균 )
- 배 양 : B - CYE 배지
- legionella 세균이 일으키는 감염 모두를 legionellosis 라고 부른다.
: 폐렴인 재향군인병 뿐 아니라 Pontiac fever 도 일으킨다.
-------------------------------------------------------------------------------------------------
----------------------------------------------------------------------------------------------
* V. cholera : V.parahemolyticus 와의 차이점 - 호염기성, 여름에 rice-water like stool specime
G (-), 단모성, 운동성 (+) , K / A
증균배지 : Alkaline Peptone water
선택배지 : TCBS (Thiosulfate, Citrate, Bile Salt, Sucrose) - 지시약 : BTB
→ 배지색 : Green ------------------→ Yellow --+- Cholera (+)
Sucrose 발효 +- Para (-)
0.5 % Sodium desoxycholate → string (+)
--------------------------------------------------------------------------------------
* Salmonella 와 Citrobacter 의 생화학적 성상의 차이점.
+-------------+--------------+---------------+------------+-------+-------+
| 구 분 | IMViC Test | TSI ( KIA ) | Motility | LIA | KCN |
+-------------+--------------+---------------+------------+-------+-------+
| Salmonella | - + - + | K / AGS | + | + | - |
+-------------+--------------+---------------+------------+-------+-------+
| Citrobacter | - + - + | d / AGS | + | - | + |
+-------------+--------------+---------------+------------+-------+-------+
# KCN ( 시안화 칼륨 ) 감수성 시험
- 목 적 : Citrobacter ( Paracolon ) 속과 Salmonella 속 감별에 중요하다.
No Growth ( - ) : E. coli, Shigella, Salmonella 속
# LIA ( Lisine Iron Agar ) Test
① Lysine Decarboxylase (+) ② Lysine Decarboxylase (-)
| -+---- Slant : Violet | -+---- Slant : Violet
| -+---- Butt : Violet | -+---- Butt : Yellow
( Salmonella 속 ) ( Citrobacter 속 )
# 장내세균중 운동성이 없는균 : Sal. gallinarum, Shigella 균속, Klebsiella 균속.
-----------------------------------------------------------------------------------------------
# Mycobacterium tuberculosis
# 동정순서 : AFB stain - 집균 - 배양 - Niacin
# 형 태 : Gram (+) bacilli, 절대 호기성균, Motility (-)
# Stain : Ziehl - Neelson 에 쓰이는 시약은 ?
carbolfusin , alcohol , HCl , Methylene blue
# Niacin 시험 - 인형 결핵균 ( M . tuberculosis ) 만 양성 - 황색
# 객담 전처리용 약제 : 객담 소화, 잡균억제, 균등화
- 4 % NaOH or KOH
-----------------------------------------------------------------------------------------------
-----------------------------------------------------------------------------------------------
# 색소 생성능 Test ( 비정형 Mycobacterium )
① Group Ⅰ → Photochromatic ( 광 발색균, Yellow ) : M. kansani, M. marinum
- 광이 있어야만 색소형성.
② Group Ⅱ → Scotochromatic ( 암 발색균, Yellow ) : M. scrofulaceum, M. szulgi
- 암소, 광소에서 모두 색소형성.
③ Group Ⅲ → Non - Chromatic ( 비발색균 ) : M. intracellular, M. avium
- 색소를 생성치 않는다.
④ Group Ⅳ → 신속 발육균 ( 7 일 이내 ) : M. fortuitum
⑤ Not Group → M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum
# Ogawa media ( Tb 배양 - 간헐멸균 )
1) Glycerin : 인형 결핵균 증식, 우형 결핵균 증식억제
2) Malachite green : 보통세균 억제
-----------------------------------------------------------------------------------------------
* Corynebacterium diphtheria
# Metachromatic Granule ( 이염소체 ) Stain ( = Babes - Ernst Body )
# 형 태 : Gram (+) bacilli , Motility (-) , capsul (-) 아포가 없다.
# Albert's Stain ( 이염소체 염색법 )
- 판 정 : 디프테리아 균의 과립은 까맣게, 세포질은 연록색으로 염색된다.
# 특수 배지
- Pot. tellurite → black Colony
- Löeffler's serum agar → Cream Colony
# 최종동정 : 독소생성 시험 ( Eleck method ) → 독소 항독소 침강반응 ( 면상반응 )
- Shick test ( Diphtheria 면역상태 검사 )
# Exotoxin ( 체외독소 )
# Loeffler Methylene blue simple Stain
# Metachromatic granule ( = Bobes - Ernst body ) : 이염소체 염색 → 아령모양
① Methylene blue Simple Stain
② Albert Stain : 이염소체 ( Dark blue ), Band ( 청색 또는 청녹색 ),
세포형질 ( 연한녹색 )
③ Neisseria Stain
④ Ljubinsky Stain
-------------------------------------------------------------------------------------------------
# Genus Klebsiella ( - - + + ) ( A/AG )
1. Klebsiella pneumoniae ( = Friedlander Bacillus ) = 폐렴간균
2. 운동성 (-), Lactose (+), Urea (+) 서서히 분해, Capsule (+)
3. Streptococcus pneumoniae 가 95 %, 폐렴간균이 3 - 5 % 로 폐렴간균이 원인균이다.
4. Blood Agar 에서 점액 ( String Test ) 을 생산한다.
------------------------------------------------------------------------------------------------
------------------------------------------------------------------------------------------------
* Streptococcus pneumonia
: Optochin, Bile, Inulin, 협막 팽화 시험
# Lancet diplococci shape ( 쌍을 이루고 있다. ) - Gram (+) 쌍구균, capsule
# 배 양 성 상 - 물방울 같고 점조성인 집락
- α - Hemolysis ( Hb 의 Heme 성분이 유리되어 생성 ) 로 Green Color
# 배지에서 자가용해 ( Autolysis ) 를 하므로, 집락은 시간이 경과되면 중앙이 함몰된다.
# Neufield - Quellung test ( 협막 팽화 시험 ) → 최종 동정법
# CRP ( C - Reactive Protein ) test
# 상기도에 상주하는 균
# Optochin ( ethylhydrocuprein : EHC ) S. pneumonia 억제
# Bile Solubility Test ( Bile 용해시험 )
- 목 적 : Pneumococcus (+) 와 Viridans Group (-) 와의 구별
-------------------------------------------------------------------------------------------------
# Streptococcus pyogenes ( Group A, 화농성 연쇄상 구균, β, Bacitracin )
* Antistreptolysin O Titer ( = ASLO Titer )
- Streptolysin 은 사람과 토끼의 적혈구를 용혈시키는 효소이다.
+- Ag ( Streptolysin O ) + Ab ( Serum ) + RBC = Hemolysis ( 항체 X )
+- Ag ( Streptolysin O ) + Ab ( Serum ) + RBC = Non - Hemolysis ( 항체 O )
- 목 적 : Group A 가 생성 ( Rheumatic Fever 진단시 이용. → 여성 환자에게 많다.)
- 판 정 : (+) → 166 Todd Unit
--------------------------------------------------------------------------------------------------
* Shigella
- IMViC ( d + - - ), TSI K/A, Motility (-)
- Shi. dysenteriae 의 최종동정 : mouse 복강 접종. 혈청학적 검사
--------------------------------------------------------------------------------------------------
# Clostridium : G (+) bacillus 혐기성 - Spore 형성균
- Terminal spore : Clostridium tetani → 혐기성균
- 인체 병원성 세균중 아포를 형성하는 균군은 Bacillus 균속과 Clostridium 균속이다.
- 호기성 Spore 형성균 : Bacillus
혐기성 Spore 형성균 : Clostridium
- Swarming 현상 ( Clostridium tetani : 약함 )
----------------------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------------------------
# M. leprae ( = Hansen's bacilli )
- 나병의 원인균, 인공배양이 안된다.
--------------------------------------------------------------------------------------------------
* Genus Proteus ( 부패균 = 변형균 )
# G (-) 간균 , 주모성 편모 ( 운동성 + )
# TSI ( = KIA ) K/AGS, Urea (+), Phenylalanin deaminase : PPA (+), Lactose (-)
+----------------+---------------+-----------+----------------+-------------+
| 구 분 | IMViC Test | Indole | Methyl - Red | Ornithine |
+----------------+---------------+-----------+----------------+-------------+
| P. vulgaris | + + - - | + | + | - |
+----------------+---------------+-----------+----------------+-------------+
| P. mirabilis | - + - + | - | + | + |
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(?) * Mac, desoxylcholate agar : 독립된 무색 집락
# Weil - Felix Reaction ( 비특이적 반응 )
- P. vulgaris 항원과 리케치아의 공통항원을 이용한것.
+- OX - k : 양충병 ( R. Tsutsugamushi )
+- OX - 19 : 발진티푸스, 발진열.
+- OX - 2 : 발진티푸스, 발진열
# Urea media : Proteus 동정에 특이적 - 여과멸균
# PPA Reaction - PPA 반응은 Phenyl Alanine Agar - Deamination
* PPA 란 Phenyl Pyruvic Acid 이고, IPA 란 Indole Pyruvic Acid 의 약자이다.
# 파상발육 억제물질 : Trimethoprim, Chloral hydrate, Sulfathiazol, Sod. azide,
Alcohol 농도를 강하게, Agar 농도를 강하게 , NaCl 제거, Medium 의 수분제거 등.
파상발육 물질 : Sod. Chloride (?)
# 기타 균주
- Proteus morganii : K/AG, 식중독의 원인균.
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# Coliform bacilli --+- 1) Escherichia coli ( E. coli )
+- 2) Citrobacter freundii
+- 3) Klebsiella pneumoniae
+- 4) Enterobacter aerogenes
# Enterobacter aerogenes ( A/AG )
- Lactose (+), 운동성 (+) 로 Klebsiella 와 감별된다.
- K. pneumoniae : 운동성 (-), OD (-)
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# Neisseria meningococcus : Kidney shape diplococci
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| Species | 병원성 | Oxidase | Glucose | Maltose | 검 체 |
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| N. gonorrhoeae | 임 질 | + | + | - | 관절액, 요, ( Synovial fluid ) |
+-------------------+--------+---------+---------+---------+-----------------------------+
| N. meningitidis | 수막염 | + | + | + | sucrose (-) C. S. F |
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* 임균과 수막염균을 제외한 Neisseria 는 구강내의 상재균을 형성 ( 비병원성 )
* 배 양 : 호기성 ( 5 - 10 % CO2 요구 → Candle Jar )
* Chocolate agar 에 배양한 후두 가검물로 G(-) , Oxidase (+) 으로 나타나면 ? ('88 국시)
- Neisseria meningitidis
* 임균과 수막염균의 증균배지 : Thayer - Martin VCN : 증균배지
CTA ( Cystin Trypicase Agar ) : 당분해 배지
# Neisseria 속 감별에 이용되는 Oxidase Test
1) 1 % P - Aminodimethylaniline monohydrochloride 수용액을 집락에 몇방울 적하하여
색의변화 관찰. ( Tetramethyl - P - phenylene dianine HCl )
2) 양성일때는 Pink 색 → 적자색 → 흑색으로 변한다.
* Pink Color 는 균이 살아있는 상태이고, Black Color 는 균이 죽은상태이다.
3) Oxidase (+) 균 : Neisseria, Pseudomonas
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* Haemophilus
- 가토혈액을 사용하는 것이 가장 좋다.
# Haemophilus influenzae → H - I Test
- G (-) 소간균, Spore (-), Capsule (+)
- 배 양 --+- 보통 한천배지에서 발육하지 않는다.
| ( 혈액한천, Chocolate 한천 사용 ) → 5 - 10 % CO2 요구.
+- 발육소 : X 인자 ( 내열성 ), V 인자 ( 이열성 ) 필요.
+- Satellitism 현상 ( 위성현상 ) : 포도상구균 집락에 커다란 집락 형성.
- 수막염의 원인균, 상기도 상재균
- X, V 인자 요구, Porphyrin 시험 - 음성,
# H. ducreyi ( 연성하감균 )
- X 인자를 필요로 한다.
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* Urea (+) : M. morganii , C. neoformans , K. pneumoniae
* Negri 소체 - Rabies virus
* 고압 증기 멸균 ( Autoclave )
- 121 ℃ ( 250 ℉ ) / 15 lb / 15 - 20 min → Spore 멸균에 가장좋다.
* Stuart's Transport Medium - 면봉으로 직접 채취한 경우
* Littman India Ink ( 묵즙검경 ) : Capsule 형성균 관찰 → Crytococcus
Lactophenol Cotton Blue Stain : permatophytes 관찰
* Candle Jar
# 호기성 및 혐기성 세균의 여러 균종이 CO2 가 있어야 증식되거나 더 잘 증식된다.
# 혐기성 배양방법이 아니다.
* 혐기성균 배양법
- Gas 치환법, Gas Pak ( 촉매법 ), Steel Wool 법, Pyrogallol 법 등이 있다.
↳ 지시약 : Methylene blue - 무색 ( O2 침입 시 blue )
* 즉시 접종이 불가능할 경우 - Buffered Glycerol Saline
* Capsule 형성균 : Klebsiella pneumoniae, Strepto pneumoniae, Clostridium perfringens,
Neisseria, Bacillus anthracis ( 탄저균 ), Cryptococcus neoformans,
Bordetella pertusis ( 백일해 ) 등.
* 무아포균 : H. influenzae, B. pertusis, C. diphtheria
* 수막염 원인균
- N. meningitidis, Cryptococcus neoformance, H. influenza, S. pneumoniae, Listeria
* Brom thymol blue ( 6.0 - 7.6 ) : Yellow(acid) Blue(alk) - Simmon citrat agar, O-F, TCBS
* Staphylococcus No. 110 배지 ( 선택, 감별배지 )
- Gelatin ( 3 % ), Mannitol ( 1 % ), NaCl ( 7.5 % )
* S. aureus 의 역학조사 : Phage Typing
* 색소 생성균 - Serratia ( Red ), S. Albus ( White ), S. aureus ( Gold yellow ),
S. citreus ( Yellow ), Pseudomonas ( Green ), Sarcina ( 등색 ) 등.
* 진균의 현미경적 관찰
- 10 % KOH : 각질, 손톱, 피부는 용해되나 Yeast, Hyphae 는 그대로 남는다.
- Yeast, Fungi 의 현미경적 관찰시 염색 : Lacto phenol cotton blue 염색
* Thioglycollate : 혐기성균 배양. ( 실온보관, 호기성균도 잘자랄수 있다.) → Yersinia (22℃ 발육)
* Voges - Proskauer ( VP ) Reaction → Broth
포도당에서 Acethyl-Methyl Carbinol ( = Acetoin ) 생성하면 VP 시약과 반응하여
---、 Butylene Glycol ( 적색 )
* 사상형 진균 ( Mycelium like fungi ) - 균사체 ( Mycelium )
- 종류 : Rhizopus : 격벽 ( Septum )
* Slide culture : 생식균사와 영양균사의 형태를 자연상태로 관찰할 수 있다.
* Amino acid ' Decarboxlase Test ' ( 아미노산 탈탄산 시험 )
- Result : Violet → Yellow → Violet 으로 변하면 양성
* Gram (-) 억제 : Chloral hydrate, Pot. tellurite ( 파상풍 발육억제 ), Sod. azide,
ex) Proteus Phenyl ethyl alcohol ( PEA ) 등
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