2. Reticulum fibe 염색
⑴ 세망 섬유의 특징
① H&E stain에서 불 수 없다.
② 호은성이다.
③ 간, 비장, 임파절, 골수(조혈장기), 기저막(Base ment
membrane)의 결합 조직 층에 분포
④ 기능: 지지(support) 기능
⑵ 진단 의의
① 조직 괴사 간경변증을 알 수 있다.(간세포를 지지하는 세망섬유
가 존재하면 재생가능)
② 임파조직의 종양구별(원발성 종양)이다.
③ 세망섬유가 집단을 감싸고 있을 경우: 전이성 종양(Carcinoma)
④ 세망섬유가 하나의 세포마다 감싸고 있을 경우: Sarcoma
⑶ 도은법(siver stain): 금속침투법
① 원리: ⅰ. 산화: Pot.permangnate 등으로 세망섬유 팽창
(금속염이 잘 침착되도록 처리, 보라색)
ⅱ. 산화제 제거: Sod.metabisulfite (무색)
ⅲ. 감작: 은(Silver) 침투 전 처리 과정
황산암모늄 제2철(ferric ammonium sulfate) 등의
금속염을 침투 (금속 유기화합물을 형성)
ⅳ. 은용액 침투: 무색의 은 암모니아 착염을 처리
(Ammonical silver)
ⅴ. 환원 또는 현상: 가시화 과정
Formaldehyde (20% formalin) ⇒ 금속은 Metalic
silver로 환원 (침전된 2ag가 흑색으로 나타난다.)
ⅵ. 현색(toning): 침전된 금속은을 조색제인 염화금에
의해서 metalic gold로 환원시키는 과정 (0.2% Gold
chloride)
ⅶ. 정착 (Removal of unreacted silver): Hyper용액
(Sod. thiosulfate)으로 반응하지 않은 은이온을 제
거
② 결과: 세망섬유 - black. 배경 - gray
⑷ Gomori's ammonical silver stain
① 원리: ⅰ. 세망섬유는 은이온을 흡착하는 성질을 이용
ⅱ. 은 착이온을 제조, 세망섬유에 흡착시킨 다음
ⅲ. 환원제를 첨가하여 눈으로 볼 수 있도록 처리한다.
② Ammonical silver 용액 (은용액 침투) - AgNO3
- KOH
- 농 ammonia 수
③ 도은 염색법에서 조직 절편은 은용액에 넣었을때 흔히 절편이
탈락하는 근분적인 원인
: 은 용액이 강알카리성(pH11정도)이기 때문이다.
⑸ 도은법시 주의사항
① 반드시 초자 기구사용
② 은용액 취급주의 (오염물질)
③ 수세는 반드시 증류수
④ 절편에 접착제 사용
3. 기저막(basement membrane)염색
⑴ 특징: ① 모든 상피층의 기저변에 존재하는 세포외 구조물이다.
(상피조직과 결합조직 사이에 존재)
② 신사구체, 폐포, 등에도 존재
⑵ 기능: ① 물질의 교환 및 조절 ② 상피조직의 지지 ③ 정보교환
⑶ 구성: 당단백질(glycoprotein)
⑷ 응용: ① 상피암의 침윤 여부 ② 신장질환에 이용
⑸ 염색법: ① PAS ② Jones' stain
① P.A.S(periodic acid schiff reaction)
ⅰ. PAS 양성 물질: ㄱ Cartilage(연골기질)
ㄴ Basement membrane의 증명
ㄷ Glycogen(당원)의 증명
ㄹ fungus(곰팡이)
ㅁ Epithelial Mucin(상피점액)
ㅂ Amyloid
ⅱ. 탄수화물의 Glycol group (CHOH-CHOH)에 Periodic acid를
반응시키면 탄소결합이 분리되면서 aldehyde(CHO)기가 유리
된다.
유리된 aldehyde기에 schiff reagent와 반응시키면 적색의
정색반응을 나타내게 된다.
ⅲ. 염색용액
ㄱ. 0.5% periodic acid
ㄴ. schiff reagent - Basic fuchsin(적색)
- Hcl
- Sod. metabisulfate을 식힌 후
(50℃)첨가
냉암소에 24-48hr 방치하면 무색으로 나타난다.(색제거: 활성탄소
혼합후 여과)
☆ 용액의 검증
Conc. formalin을 증발접시에 준비한 후 Schiff reagent를 droping
한다. 즉시 Red purple로 되면 사용가능, Blue purple로 변하면
사용불가
시약의 보관 - 갈색병(암소) 냉장고 보관
ⅳ. 염색 방법
ㄱ. 탈 파라핀, 함수,수세
ㄴ. 0.5% Periodic acid 5분간 산화(aldehyde기 생성)
ㄷ. Schiff 시약에 10분간 염색(적색)
ㄹ. 조직 표본이 연분홍색으로 발색될 때 까지 유수에 10분
간 수세(착색)
ㅁ. Harris hematoxylin 용액에 2-3분간 핵염색(청색)
ㅂ. 1% Hcl alcohol에 2-3dip 탈색(분별)
ㅅ. 유수에 수세(10분정도)
ㅇ. 탈수,투명,봉입
ⅴ. 염색결과
PAS 양성물질 - Red-reddish purple
핵 - blue
세포질 및 back ground - purple pink
② PAMS
ⅰ. 원리: 당 단백질을 Periodic acid로 산화시켜 aldehyde 기
가 형성, 여기에 Methanamine silver와 반응시켜
aldehyde 가 은을 환원 시켜 흑색은 Metalic silver
를 형성하게 한다.
ⅱ. 참고: 절편 두께는 2-3 micro정도 이어야 한다.
Oven에서 58-60℃로 Coplin jar에 넣어둔다.(안정성
을 유지하기 위함)
③ Jones' Periodic acid-methenamine silver stain
ⅰ. 원리: 0.5% Periodic acid로 기저막을 산화시켜 aldehyde기
를 형성시킨 다음 methenamine silver 착이온을 반응
시키면 aldehyde기가 silver 이온을 환원시켜 흑색
의 금속은을 형성한다.
ⅱ. 염색과정
ㄱ. 탈파라핀, 함수 수세
ㄴ. 0.5% periodic acid(산화) - aldehyde기 형성
ㄷ. methenamine silver 용액(반응) - 56℃ 부란기 1시간
ㄹ. 0.2% Gold Chloride(현색) - Toning
ㅁ. 0.5% Sod.thiosulfate(정착) - 금속이온 제거
ㅂ. 수세
ㅅ. H＆E stain
ㅇ. 탈수, 투명, 봉입
ⅲ. 결과: 기저막 - 검정색, 핵 - 청색, 나머지 - 적색
☆ methenamine: 알카리 특성, Sod.borate: 완충액, 냉장고
보관 시약, 금속 제품에 사용을 금지
4. Elastic fiber(탄력섬유)
⑴ 의의: 동맥 경화증, 혈관성 질환, 노인성 폐위축(emphysema), 섬유
성 심판막증
⑵ 탄력섬유의 분포: 동맥 혈관벽, 폐포(alveoli), 피부(진피)
⑶ 염색 종류: ① Verhoeff-Van Gieson stain
② Weigert's resorcin-fuchsin
③ Gomori's aldehyde-fuchsin
④ Unna's Orcein
⑷ Verhoeff's Van Gieson elastic fiber stain
① 주시약: Verhoeff's solution
- Alcohol hematoxylin
- 10% ferric hematoxylin
- Iodine
2% ferric chloride(분별액)
5% Sod. thiosulfate
Van Gieson solution(대조염색)
② 원리
ⅰ. 과염: hematoxylin+ferric chloride+iodine 복합체 - 강한
친화력을 갖는다.(조직전체를 과염)
ⅱ. 분별: 농도가 낮은 ferric chloride로 감별한다. - 탈섬유
는 서서히 탈색 기타조직은 신속히 제거
☆ 탈색시간이 중요
③ 결과: Elastic fiber - blush black
Nuclei - blush black
Collagenfiber - Red
Cytochrome muscle - Yellow
V-V W-R G-A U O
---------------------------------------------------------------
주시약 Hematoxylin ㅣ Basic fuchsin ㅣ Basic fuchsinㅣ Orcein
ferric chlorideㅣ resorcin ㅣ Paraldehyde ㅣ Hcl
iodine ㅣ ferric chlorideㅣ Hcl ㅣ
ㅣ Hcl ㅣ ㅣ
----------------------------------------------------------------
본염색 Hematoxylin ㅣ Hematoxylin ㅣHematoxylin ㅣHematoxylin
----------------------------------------------------------------
분별 Ferric-chlorideㅣ 95% alcohol ㅣ70% alcohol ㅣ 70% Alcohol
-----------------------------------------------------------------
대조염색 Van GiesonㅣVan Gieson ㅣLight green ㅣMethylen Blue
-----------------------------------------------------------------
염색결과 Black(흑색)ㅣBlack(흑청색) ㅣPurple(적색) ㅣDark brown
(갈색)
-----------------------------------------------------------------
5. Muscle 염색
⑴ 의의: 근육종과 다른 육종과의 구별
⑵ Mullary's PTAH
① Zenker 용액에 고정해야 한다. 탈 승홍이 따라야 한다.
② hematoxylin - lake: 근섬유를 청색으로
phosphotungtic acid : hematoxylin = 20 : 1
③ pot. permangnate: 산화시킨다.
④ 여분의 tungstic iron: 교원섬유(주황색)
⑶ 결과: Cross striation in muscle fiber - blue
Fibrin - blue
Nuclei - blue
Collagen fiber - brownish(오렌지색)
6. 탄수화물 염색
⑴ PAS(위에서)
⑵ D-PAS
: Diastase가 당원을 분해 시키는 원리, True glycogen을
증명하기 위한 염색법
① 방법: 1. 검사하고자 하는 조직 절편을 두장 준비한다.
2. 한 장은 Diastase로 처리하고(D-pas), 다른 한 장은
buffer sol으로 처리한다.
3. P.A.S 염색한다.
② 결과: P.A.S D - P.A.S
당원 + -
기타양성물질 + +
③ schiff regent: Basic fuchsin(주시약), D.W,
Sod.metabisulfate, HCl
7. Glycogen 염색
⑴ 의의: Glycogen(당원종), 종양진단시
⑵ 종류: ① Best's carmin
② D-PAS
③ Bauer-Feulgen reaction
④ Methanamin silver
① Best's carmin stain
ⅰ. 원리: 알카리 용액에서 당원의 OH기와 음이온으로 하전된
carmin의 phenol기가 수소 결합을 하면서 염색
ⅱ. 고정: 무수 Alcohol, carnoy용액으로 한다.
ⅲ. 결과 : Glycogen - Deep red
② D-PAS
ⅰ. 원리: Diastase가 당원을 분해시키는 원리, True Glycogen을
증명하기 위한 염색법
ⅱ. 과정: 1)하고자 하는 조직 절편을 두장 준비한다.
2) 한 장은 Diastase로 처리하고
3) 다른 한 장은 Buffer .sol으로 처리한다.
4) P.A.S염색을 한다.
P.A.S D-P.A.S
③ 결과: 당원 + -
기타 양성물질 + +
8. Mucicarmine(중성점액) 염색
⑴ 점액 분비성 선암과 미분화성 편평암과의 감별(위암)
⑵ 염색법: Mayer's Mucicarmin stain
① 시약: ⅰ. Weight iron hematoxylin(핵염색)
ⅱ. Mucocarmin sol
- Carmin
- Aluminium chloride
ⅲ. Methanil yellow(대조염색)
② 염색 방법
ⅰ. 탈파라핀 함수, 수세
ⅱ. Weigert's Iron hematoxylin: 10분간 핵염색(청색)
ⅲ. 유수에 10분간 수세
ⅳ. Muci-carmin 사용액에 30분 이상 염색
ⅴ. 증류수로 2-3회 행굼
ⅵ. 0.25% matanil yellow 용액에 15초 1분간: 대조염색
ⅶ. 증류수 2-3회 헹굼
ⅷ. 탈수, 투명, 봉입
③ 염색결과: Mucin, Cytococcus capsule - Red-drop rose(적색)
Nuclei - Bluish black(청색)
Black ground - Yellow
9. 산성점액 염색
⑴ Alcian blue stain for acid mucopolysaccharide
① 산성물질을 증명하는 방법: 점액을 분비하는 선암이나 미분화성
상피암의 감별, 폐의 신생을 증명
② 염색용액
- 3% acetic acid 수용액
- Alcian blue pH2.5용액
- Nuclear fast red 용액
③ 방법
ⅰ. 3% Acetic acid 수용액에 3분간 처리
ⅱ. Alcian blue pH2.5용액에 30분간 염색
ⅲ. 유수에 10분간 수세
ⅳ. 증류수로 여러번 헹군다.
ⅴ. Nuclear fast red 용액에 3-5분
ⅵ. 증류수로 여러번 헹군다.
ⅶ. 탈수, 투명, 봉입
④ 결과: Acid mucosubstance - blue
Nuclei - Pinkish red
Cytoplasm - Pale pink
⑵ Alcian blue pH1.0의 sulfated acid mucosubstance 염색
: Sulfated acid substance만 증명
Nuclear fast red - 대조 염색
결과는 ph2.5와 같다.
⑶ Alcian blue - PAS (이중염색법)
- Alcian blue: 산성점액 물질 염색
- Schiff: PAS 양성물질 염색
Acid Mucosubstance - Blue
Epitherial Mucin, Cartilage - Purple
Neutral Mucosubstance - Reddish purple
P A S 양성물질 - red
⑷ Colloidal iron stain(철 포착반응)
① 원리: 산성용액하에서 점액 물질의 산성기와 colloidal iron간
의 친화성을 이용 즉 산선점액 다당류에 iron을 결합하
여 형성된 iron chelate를 Prussian blue reaction으로
증명하는법
② Nuclear fast염색을 대조 염색으로 이용
결과: Acid mucosubstance - Bright blue
Nuclei - Pinkish red
Cytoplsm, background - pale pink
10. Amyloid 염색
⑴ 병적 상태: 감염성 질환시 세포간질에 침착되는 무형의 호산성 물
질
⑵ Amyloidosis(유전분증) - 원발성: 간 , 심장, 비장, 췌장, 골격
근, 혈관벽
- 속발성: 류마티스성, 관절염, 만성 골수
염
⑶ 염색법 종류
① Congo red stain
② Metachromatic stain
③ Thioflavin T 형광법
④ 면역학적 방법
① Congo red stain
ⅰ. 염색원리 및 목적
Amyloid를 증명하는 방법으로 간장, 심장, 신장, 비장 및
췌장에 존재하는 amyloid와 악성종양, 만성 염증성 질환등의
조직에 침착한 amyloid를 Congo red 염료로 염색 Congo red 염
료의 Azo기와 amine기는 amyloid의 hematoxylin와 수소 결합
을 하여 pinkish red로 나타난다.
ⅱ. 염색용액
- Congo red 용액
- 포화 lithium carbonate 용액
- Harris hematoxylin 용액
ⅲ. 염색방법
ㄱ. 탈파라핀, 함수, 수세
ㄴ. Congo red 용액 10-30분간 염색
ㄷ. 포화 lithium Carbonate에 15초간 감별
ㄹ. 유수에 15분간 수세
ㅁ. Harris hematoxylin에 2-3분간 핵염색
ㅂ. 1% Acid alcohol에 2-3dip 탈색
ㅅ. 유수에 수세
ㅇ. ammonia수에 5-10분 dip 핵을 청화
ㅈ. 유수에 청화
ㅊ. 탈수, 투명, 봉입
ⅳ. 염색결과
유전분 - red, Pinkish red
Nuclei - Blue
Background - Unstained
② Thioflavin T 형광염색법
: 예민도가 높다, 특이도가 낮다
변색성 염색을 병행하여 낮은 특이성을 보완한다.
결과: Amyloid - Bright yellow
11. Lipid (지질)
: 지질은 유기용매에 용해되는 특성을 지닌 이질기로 구성된 물질이며
단순지질, 복합지질, 유도지질로 나뉜다.
⑴ 의의: 색전증 , 지방변성(간,심장, 동맥경화증), 종양구별, 비지
방 조직에서 지질 축적등
⑵ 고정: 신선한 조직을 바로 동결절편한다.
⑶ 염색액의 용매: Propylene glycol을 주로 사용하며 isopropanol도
이용된다.
⑷ 봉입: 수용성 봉입제를 쓴다.(Gllycerin jelly)
⑸ 증명법
① 편광 현미견 관찰
② 형광현미경 Lipofuchsin, Corticosterol, Estragen등은 형광을
발한다.
퇴행성 변화를 보이는 물질에 잘 침착
③ 염료이용법 (많이 이용한다.)
: 염료의 지질 용해성을 이용 , 용매에 포함된 염료(지용성 염
료)는 용매보다 지질이 더 잘 용해된다. 용해도의 차이를
이용
⑹ Oil red O
① 목적: 중성지방을 증명할 때 사용
② 염색용액
ⅰ. Oil red O 용액
ⅱ. 85% Prophylene glycol 용액
ⅲ. 희석 Harri's hematoxylin 용액
③ 염색 방법
ⅰ. 신선한 조직을 10mm로 동결절편, Formalin에 고정했던 조직
은 gum-sucrose처리 한 후 동결절편
ⅱ. 100% prophylene plycol에 5분간 처리: 완전탈수
ⅲ. 60℃ oven에 있는 Oil red O 용액에 7분간 염색
ⅳ. 85% Prophylene glycol에 3분간 처리: 감별
ⅴ. 증류수에 여러번 수세
ⅵ. 희석 Hematoxylin 용액에 2분간 핵염색
ⅶ. 유수에 수세하여 핵을 청화
ⅷ. 증수를 여러번 헹굼
ⅸ. 수용성 봉입제로 봉입
④ 염색결과
Fat - red
Nuclei - blue
⑺ Sudan black B
① 지방질과 지질을 염색할 때 사용한다.
② 동결절편한 조직표본은 통상 조직표본제작 과정에도 저항한
지질성분들을 paraffin절편으로 증명할 수 있다.
③ 염색반응은 Sudan계 염료의 염색기전인 용해성 물질적 반응으로
이루어진다.
④ 염색 용액
ⅰ. Sudan black B
ⅱ. 85% Prophylene glycol 용액
ⅲ. Nuclear Fast red
⑤ 염색 방법
ⅰ. 신선한 조직을 10mm로 동결절편하거나 formalin에 고정했던 조직
을 gum sucrose 덩어리를 한 후 동결절편
ⅱ. 100% prophylene glycol에 10분간 처리: 완전탈수
ⅲ. 60℃에 있는 Sudan black B 용액에 10분간 염색
ⅳ. 85% Prophylene glycol에 5분간 감별
ⅴ. 증류수에 여러번 수세
ⅵ. nuclear fast red에 1분간 핵염색
ⅶ. 증류수를 여러번 수세
ⅷ. 수용성 봉입제로 봉입
⑥ 결과
ⅰ. 동결절편의 경우
Fat , Lipid - black
Nuclei - red
ⅱ. paraffin 절편의 경우
phospholipid, liphofucshin, leukocyte - black
Nuclei - red
Cytoplasm - pink
⑴ 세망 섬유의 특징
① H&E stain에서 불 수 없다.
② 호은성이다.
③ 간, 비장, 임파절, 골수(조혈장기), 기저막(Base ment
membrane)의 결합 조직 층에 분포
④ 기능: 지지(support) 기능
⑵ 진단 의의
① 조직 괴사 간경변증을 알 수 있다.(간세포를 지지하는 세망섬유
가 존재하면 재생가능)
② 임파조직의 종양구별(원발성 종양)이다.
③ 세망섬유가 집단을 감싸고 있을 경우: 전이성 종양(Carcinoma)
④ 세망섬유가 하나의 세포마다 감싸고 있을 경우: Sarcoma
⑶ 도은법(siver stain): 금속침투법
① 원리: ⅰ. 산화: Pot.permangnate 등으로 세망섬유 팽창
(금속염이 잘 침착되도록 처리, 보라색)
ⅱ. 산화제 제거: Sod.metabisulfite (무색)
ⅲ. 감작: 은(Silver) 침투 전 처리 과정
황산암모늄 제2철(ferric ammonium sulfate) 등의
금속염을 침투 (금속 유기화합물을 형성)
ⅳ. 은용액 침투: 무색의 은 암모니아 착염을 처리
(Ammonical silver)
ⅴ. 환원 또는 현상: 가시화 과정
Formaldehyde (20% formalin) ⇒ 금속은 Metalic
silver로 환원 (침전된 2ag가 흑색으로 나타난다.)
ⅵ. 현색(toning): 침전된 금속은을 조색제인 염화금에
의해서 metalic gold로 환원시키는 과정 (0.2% Gold
chloride)
ⅶ. 정착 (Removal of unreacted silver): Hyper용액
(Sod. thiosulfate)으로 반응하지 않은 은이온을 제
거
② 결과: 세망섬유 - black. 배경 - gray
⑷ Gomori's ammonical silver stain
① 원리: ⅰ. 세망섬유는 은이온을 흡착하는 성질을 이용
ⅱ. 은 착이온을 제조, 세망섬유에 흡착시킨 다음
ⅲ. 환원제를 첨가하여 눈으로 볼 수 있도록 처리한다.
② Ammonical silver 용액 (은용액 침투) - AgNO3
- KOH
- 농 ammonia 수
③ 도은 염색법에서 조직 절편은 은용액에 넣었을때 흔히 절편이
탈락하는 근분적인 원인
: 은 용액이 강알카리성(pH11정도)이기 때문이다.
⑸ 도은법시 주의사항
① 반드시 초자 기구사용
② 은용액 취급주의 (오염물질)
③ 수세는 반드시 증류수
④ 절편에 접착제 사용
3. 기저막(basement membrane)염색
⑴ 특징: ① 모든 상피층의 기저변에 존재하는 세포외 구조물이다.
(상피조직과 결합조직 사이에 존재)
② 신사구체, 폐포, 등에도 존재
⑵ 기능: ① 물질의 교환 및 조절 ② 상피조직의 지지 ③ 정보교환
⑶ 구성: 당단백질(glycoprotein)
⑷ 응용: ① 상피암의 침윤 여부 ② 신장질환에 이용
⑸ 염색법: ① PAS ② Jones' stain
① P.A.S(periodic acid schiff reaction)
ⅰ. PAS 양성 물질: ㄱ Cartilage(연골기질)
ㄴ Basement membrane의 증명
ㄷ Glycogen(당원)의 증명
ㄹ fungus(곰팡이)
ㅁ Epithelial Mucin(상피점액)
ㅂ Amyloid
ⅱ. 탄수화물의 Glycol group (CHOH-CHOH)에 Periodic acid를
반응시키면 탄소결합이 분리되면서 aldehyde(CHO)기가 유리
된다.
유리된 aldehyde기에 schiff reagent와 반응시키면 적색의
정색반응을 나타내게 된다.
ⅲ. 염색용액
ㄱ. 0.5% periodic acid
ㄴ. schiff reagent - Basic fuchsin(적색)
- Hcl
- Sod. metabisulfate을 식힌 후
(50℃)첨가
냉암소에 24-48hr 방치하면 무색으로 나타난다.(색제거: 활성탄소
혼합후 여과)
☆ 용액의 검증
Conc. formalin을 증발접시에 준비한 후 Schiff reagent를 droping
한다. 즉시 Red purple로 되면 사용가능, Blue purple로 변하면
사용불가
시약의 보관 - 갈색병(암소) 냉장고 보관
ⅳ. 염색 방법
ㄱ. 탈 파라핀, 함수,수세
ㄴ. 0.5% Periodic acid 5분간 산화(aldehyde기 생성)
ㄷ. Schiff 시약에 10분간 염색(적색)
ㄹ. 조직 표본이 연분홍색으로 발색될 때 까지 유수에 10분
간 수세(착색)
ㅁ. Harris hematoxylin 용액에 2-3분간 핵염색(청색)
ㅂ. 1% Hcl alcohol에 2-3dip 탈색(분별)
ㅅ. 유수에 수세(10분정도)
ㅇ. 탈수,투명,봉입
ⅴ. 염색결과
PAS 양성물질 - Red-reddish purple
핵 - blue
세포질 및 back ground - purple pink
② PAMS
ⅰ. 원리: 당 단백질을 Periodic acid로 산화시켜 aldehyde 기
가 형성, 여기에 Methanamine silver와 반응시켜
aldehyde 가 은을 환원 시켜 흑색은 Metalic silver
를 형성하게 한다.
ⅱ. 참고: 절편 두께는 2-3 micro정도 이어야 한다.
Oven에서 58-60℃로 Coplin jar에 넣어둔다.(안정성
을 유지하기 위함)
③ Jones' Periodic acid-methenamine silver stain
ⅰ. 원리: 0.5% Periodic acid로 기저막을 산화시켜 aldehyde기
를 형성시킨 다음 methenamine silver 착이온을 반응
시키면 aldehyde기가 silver 이온을 환원시켜 흑색
의 금속은을 형성한다.
ⅱ. 염색과정
ㄱ. 탈파라핀, 함수 수세
ㄴ. 0.5% periodic acid(산화) - aldehyde기 형성
ㄷ. methenamine silver 용액(반응) - 56℃ 부란기 1시간
ㄹ. 0.2% Gold Chloride(현색) - Toning
ㅁ. 0.5% Sod.thiosulfate(정착) - 금속이온 제거
ㅂ. 수세
ㅅ. H＆E stain
ㅇ. 탈수, 투명, 봉입
ⅲ. 결과: 기저막 - 검정색, 핵 - 청색, 나머지 - 적색
☆ methenamine: 알카리 특성, Sod.borate: 완충액, 냉장고
보관 시약, 금속 제품에 사용을 금지
4. Elastic fiber(탄력섬유)
⑴ 의의: 동맥 경화증, 혈관성 질환, 노인성 폐위축(emphysema), 섬유
성 심판막증
⑵ 탄력섬유의 분포: 동맥 혈관벽, 폐포(alveoli), 피부(진피)
⑶ 염색 종류: ① Verhoeff-Van Gieson stain
② Weigert's resorcin-fuchsin
③ Gomori's aldehyde-fuchsin
④ Unna's Orcein
⑷ Verhoeff's Van Gieson elastic fiber stain
① 주시약: Verhoeff's solution
- Alcohol hematoxylin
- 10% ferric hematoxylin
- Iodine
2% ferric chloride(분별액)
5% Sod. thiosulfate
Van Gieson solution(대조염색)
② 원리
ⅰ. 과염: hematoxylin+ferric chloride+iodine 복합체 - 강한
친화력을 갖는다.(조직전체를 과염)
ⅱ. 분별: 농도가 낮은 ferric chloride로 감별한다. - 탈섬유
는 서서히 탈색 기타조직은 신속히 제거
☆ 탈색시간이 중요
③ 결과: Elastic fiber - blush black
Nuclei - blush black
Collagenfiber - Red
Cytochrome muscle - Yellow
V-V W-R G-A U O
---------------------------------------------------------------
주시약 Hematoxylin ㅣ Basic fuchsin ㅣ Basic fuchsinㅣ Orcein
ferric chlorideㅣ resorcin ㅣ Paraldehyde ㅣ Hcl
iodine ㅣ ferric chlorideㅣ Hcl ㅣ
ㅣ Hcl ㅣ ㅣ
----------------------------------------------------------------
본염색 Hematoxylin ㅣ Hematoxylin ㅣHematoxylin ㅣHematoxylin
----------------------------------------------------------------
분별 Ferric-chlorideㅣ 95% alcohol ㅣ70% alcohol ㅣ 70% Alcohol
-----------------------------------------------------------------
대조염색 Van GiesonㅣVan Gieson ㅣLight green ㅣMethylen Blue
-----------------------------------------------------------------
염색결과 Black(흑색)ㅣBlack(흑청색) ㅣPurple(적색) ㅣDark brown
(갈색)
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5. Muscle 염색
⑴ 의의: 근육종과 다른 육종과의 구별
⑵ Mullary's PTAH
① Zenker 용액에 고정해야 한다. 탈 승홍이 따라야 한다.
② hematoxylin - lake: 근섬유를 청색으로
phosphotungtic acid : hematoxylin = 20 : 1
③ pot. permangnate: 산화시킨다.
④ 여분의 tungstic iron: 교원섬유(주황색)
⑶ 결과: Cross striation in muscle fiber - blue
Fibrin - blue
Nuclei - blue
Collagen fiber - brownish(오렌지색)
6. 탄수화물 염색
⑴ PAS(위에서)
⑵ D-PAS
: Diastase가 당원을 분해 시키는 원리, True glycogen을
증명하기 위한 염색법
① 방법: 1. 검사하고자 하는 조직 절편을 두장 준비한다.
2. 한 장은 Diastase로 처리하고(D-pas), 다른 한 장은
buffer sol으로 처리한다.
3. P.A.S 염색한다.
② 결과: P.A.S D - P.A.S
당원 + -
기타양성물질 + +
③ schiff regent: Basic fuchsin(주시약), D.W,
Sod.metabisulfate, HCl
7. Glycogen 염색
⑴ 의의: Glycogen(당원종), 종양진단시
⑵ 종류: ① Best's carmin
② D-PAS
③ Bauer-Feulgen reaction
④ Methanamin silver
① Best's carmin stain
ⅰ. 원리: 알카리 용액에서 당원의 OH기와 음이온으로 하전된
carmin의 phenol기가 수소 결합을 하면서 염색
ⅱ. 고정: 무수 Alcohol, carnoy용액으로 한다.
ⅲ. 결과 : Glycogen - Deep red
② D-PAS
ⅰ. 원리: Diastase가 당원을 분해시키는 원리, True Glycogen을
증명하기 위한 염색법
ⅱ. 과정: 1)하고자 하는 조직 절편을 두장 준비한다.
2) 한 장은 Diastase로 처리하고
3) 다른 한 장은 Buffer .sol으로 처리한다.
4) P.A.S염색을 한다.
P.A.S D-P.A.S
③ 결과: 당원 + -
기타 양성물질 + +
8. Mucicarmine(중성점액) 염색
⑴ 점액 분비성 선암과 미분화성 편평암과의 감별(위암)
⑵ 염색법: Mayer's Mucicarmin stain
① 시약: ⅰ. Weight iron hematoxylin(핵염색)
ⅱ. Mucocarmin sol
- Carmin
- Aluminium chloride
ⅲ. Methanil yellow(대조염색)
② 염색 방법
ⅰ. 탈파라핀 함수, 수세
ⅱ. Weigert's Iron hematoxylin: 10분간 핵염색(청색)
ⅲ. 유수에 10분간 수세
ⅳ. Muci-carmin 사용액에 30분 이상 염색
ⅴ. 증류수로 2-3회 행굼
ⅵ. 0.25% matanil yellow 용액에 15초 1분간: 대조염색
ⅶ. 증류수 2-3회 헹굼
ⅷ. 탈수, 투명, 봉입
③ 염색결과: Mucin, Cytococcus capsule - Red-drop rose(적색)
Nuclei - Bluish black(청색)
Black ground - Yellow
9. 산성점액 염색
⑴ Alcian blue stain for acid mucopolysaccharide
① 산성물질을 증명하는 방법: 점액을 분비하는 선암이나 미분화성
상피암의 감별, 폐의 신생을 증명
② 염색용액
- 3% acetic acid 수용액
- Alcian blue pH2.5용액
- Nuclear fast red 용액
③ 방법
ⅰ. 3% Acetic acid 수용액에 3분간 처리
ⅱ. Alcian blue pH2.5용액에 30분간 염색
ⅲ. 유수에 10분간 수세
ⅳ. 증류수로 여러번 헹군다.
ⅴ. Nuclear fast red 용액에 3-5분
ⅵ. 증류수로 여러번 헹군다.
ⅶ. 탈수, 투명, 봉입
④ 결과: Acid mucosubstance - blue
Nuclei - Pinkish red
Cytoplasm - Pale pink
⑵ Alcian blue pH1.0의 sulfated acid mucosubstance 염색
: Sulfated acid substance만 증명
Nuclear fast red - 대조 염색
결과는 ph2.5와 같다.
⑶ Alcian blue - PAS (이중염색법)
- Alcian blue: 산성점액 물질 염색
- Schiff: PAS 양성물질 염색
Acid Mucosubstance - Blue
Epitherial Mucin, Cartilage - Purple
Neutral Mucosubstance - Reddish purple
P A S 양성물질 - red
⑷ Colloidal iron stain(철 포착반응)
① 원리: 산성용액하에서 점액 물질의 산성기와 colloidal iron간
의 친화성을 이용 즉 산선점액 다당류에 iron을 결합하
여 형성된 iron chelate를 Prussian blue reaction으로
증명하는법
② Nuclear fast염색을 대조 염색으로 이용
결과: Acid mucosubstance - Bright blue
Nuclei - Pinkish red
Cytoplsm, background - pale pink
10. Amyloid 염색
⑴ 병적 상태: 감염성 질환시 세포간질에 침착되는 무형의 호산성 물
질
⑵ Amyloidosis(유전분증) - 원발성: 간 , 심장, 비장, 췌장, 골격
근, 혈관벽
- 속발성: 류마티스성, 관절염, 만성 골수
염
⑶ 염색법 종류
① Congo red stain
② Metachromatic stain
③ Thioflavin T 형광법
④ 면역학적 방법
① Congo red stain
ⅰ. 염색원리 및 목적
Amyloid를 증명하는 방법으로 간장, 심장, 신장, 비장 및
췌장에 존재하는 amyloid와 악성종양, 만성 염증성 질환등의
조직에 침착한 amyloid를 Congo red 염료로 염색 Congo red 염
료의 Azo기와 amine기는 amyloid의 hematoxylin와 수소 결합
을 하여 pinkish red로 나타난다.
ⅱ. 염색용액
- Congo red 용액
- 포화 lithium carbonate 용액
- Harris hematoxylin 용액
ⅲ. 염색방법
ㄱ. 탈파라핀, 함수, 수세
ㄴ. Congo red 용액 10-30분간 염색
ㄷ. 포화 lithium Carbonate에 15초간 감별
ㄹ. 유수에 15분간 수세
ㅁ. Harris hematoxylin에 2-3분간 핵염색
ㅂ. 1% Acid alcohol에 2-3dip 탈색
ㅅ. 유수에 수세
ㅇ. ammonia수에 5-10분 dip 핵을 청화
ㅈ. 유수에 청화
ㅊ. 탈수, 투명, 봉입
ⅳ. 염색결과
유전분 - red, Pinkish red
Nuclei - Blue
Background - Unstained
② Thioflavin T 형광염색법
: 예민도가 높다, 특이도가 낮다
변색성 염색을 병행하여 낮은 특이성을 보완한다.
결과: Amyloid - Bright yellow
11. Lipid (지질)
: 지질은 유기용매에 용해되는 특성을 지닌 이질기로 구성된 물질이며
단순지질, 복합지질, 유도지질로 나뉜다.
⑴ 의의: 색전증 , 지방변성(간,심장, 동맥경화증), 종양구별, 비지
방 조직에서 지질 축적등
⑵ 고정: 신선한 조직을 바로 동결절편한다.
⑶ 염색액의 용매: Propylene glycol을 주로 사용하며 isopropanol도
이용된다.
⑷ 봉입: 수용성 봉입제를 쓴다.(Gllycerin jelly)
⑸ 증명법
① 편광 현미견 관찰
② 형광현미경 Lipofuchsin, Corticosterol, Estragen등은 형광을
발한다.
퇴행성 변화를 보이는 물질에 잘 침착
③ 염료이용법 (많이 이용한다.)
: 염료의 지질 용해성을 이용 , 용매에 포함된 염료(지용성 염
료)는 용매보다 지질이 더 잘 용해된다. 용해도의 차이를
이용
⑹ Oil red O
① 목적: 중성지방을 증명할 때 사용
② 염색용액
ⅰ. Oil red O 용액
ⅱ. 85% Prophylene glycol 용액
ⅲ. 희석 Harri's hematoxylin 용액
③ 염색 방법
ⅰ. 신선한 조직을 10mm로 동결절편, Formalin에 고정했던 조직
은 gum-sucrose처리 한 후 동결절편
ⅱ. 100% prophylene plycol에 5분간 처리: 완전탈수
ⅲ. 60℃ oven에 있는 Oil red O 용액에 7분간 염색
ⅳ. 85% Prophylene glycol에 3분간 처리: 감별
ⅴ. 증류수에 여러번 수세
ⅵ. 희석 Hematoxylin 용액에 2분간 핵염색
ⅶ. 유수에 수세하여 핵을 청화
ⅷ. 증수를 여러번 헹굼
ⅸ. 수용성 봉입제로 봉입
④ 염색결과
Fat - red
Nuclei - blue
⑺ Sudan black B
① 지방질과 지질을 염색할 때 사용한다.
② 동결절편한 조직표본은 통상 조직표본제작 과정에도 저항한
지질성분들을 paraffin절편으로 증명할 수 있다.
③ 염색반응은 Sudan계 염료의 염색기전인 용해성 물질적 반응으로
이루어진다.
④ 염색 용액
ⅰ. Sudan black B
ⅱ. 85% Prophylene glycol 용액
ⅲ. Nuclear Fast red
⑤ 염색 방법
ⅰ. 신선한 조직을 10mm로 동결절편하거나 formalin에 고정했던 조직
을 gum sucrose 덩어리를 한 후 동결절편
ⅱ. 100% prophylene glycol에 10분간 처리: 완전탈수
ⅲ. 60℃에 있는 Sudan black B 용액에 10분간 염색
ⅳ. 85% Prophylene glycol에 5분간 감별
ⅴ. 증류수에 여러번 수세
ⅵ. nuclear fast red에 1분간 핵염색
ⅶ. 증류수를 여러번 수세
ⅷ. 수용성 봉입제로 봉입
⑥ 결과
ⅰ. 동결절편의 경우
Fat , Lipid - black
Nuclei - red
ⅱ. paraffin 절편의 경우
phospholipid, liphofucshin, leukocyte - black
Nuclei - red
Cytoplasm - pink
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