세포검사와 조직검사의 차이점
세포학은 세포를 기능적, 형태적으로 연구하는 학문
세포검사는
① 환자에게 부담이 덜하다(심적, 경제적)
② 신속한,가격저렴, 간단한 진단법.
③ 광범위한 검사할 수 있다. 탈락세포 볼 수 있다.
ex) urine은 신장에서 요관까지, 객담은 구강에서 폐까지 광범위하게 조사한다. 이에 반해 조직은 검체체취가 힘들다.
④ 병소부위를 놓칠수 있기 때문에 정확한 진단이 될 수 없다.
즉, 최종 진단은 조직에서 세포검사는 조직검사의 전검사단계이다.
【 검사물의 채취법】
1. 산부인과적 세포검사
검사물을 채취하고 도말할 때 가장 중요한 사항은 검사물이 바뀌는 것에 주의해야 한다. 검사물 채취 시에는 각종 시약에서 지워지지 않는 연필이나 다이아몬드 표식물 (diamond marker) 로 슬라이드 한쪽에 환자의 이름, 번호 등의 인식을 즉시 표시하여야 한다.
산부인과적 검사 표본
부인과적 검사물의 채취와 도말은 주로 임상 의사에 의해서 이루어지며 일반적인 정규 검진의 일환으로 질의 후원개 (posterior fornix) 와 편평-원주 접합부 (squamo-columnar junction)를 포함하는 변형대(transformation zone) 에서 채취하는 방법이 있다.
특별한 목적에 따라 자궁내경부 천자도말 (endocervical aspiration smear) 혹은 자궁 내막 흡인 (endometrial aspiration) 과 외음부 직접 찰과 도말 (direct scraping smear) 이 있다.
도말시 가장 중요한 사항은 Pap 염색을 위한 검사물은 절대로 공기 중에 건조시키지 말아야 한다. 건조되면 세포의 크기가 늘어나고 염색성이 약해져 형태학적 변화의 판별이 불가능해지기 때문이다. 따라서 공기 건조를 방지하기 위하여 도말 즉시 고정액에 담그는 작업이 우선이다.
부인과적 검사물의 채취시 중요하게 생각하여야 할 또 하나의 사항은 환자의 정보를 의뢰서에 기록하여야 한다는 것이다. 여성의 월경 주기에 대한 정보 등은 세포학적 진단에 많은영향을 미치기 때문이다. .
(1) 검사물 채취 일자 (date of procedure)
(2) 환자 연령 및 성별 (age & sex)
(3) 최종 월경기 (last menstrual period, LMP)
(4) 검사물 채취 부위 (source & site of origin)
V ; vagina
C ; cervix
E ; endocervix
EN ; endometrium
(5) 검사물 채취 방법 (method of collection)
(6) 증상 (symptoms)
(7) 병력 및 치료력 (history & treatment)
(8) 호르몬제 투약 여부 (hormonal therapy)
(9) 과거조직 세포학적 검사 여부 (previous
examination)
(10) 임상 진단 (clinical diagnosis)
부인과적 검사물의 채취시 사용되는 도구로서 슈파트라 (spatula) 혹은 설압자, 면봉 및 솔(brush) 들이 있는데, 최근에는 면봉을 사용하지 않고 있다 . 그 이유로서 비흡수성 면봉일지라도 면 섬유가 슬라이드 위에 오염되는 경향이 많고 세포가 섬유에 부착되거나 수분과 함께 흡수되어 도말 되는 세포수가 감소되기 때문이다.
최근에 유용성 있게 많이 사용되는 도구는 솔로서 풍부한 검사물을 얻을 수 있는 장점은 있으나 부드럽게 사용하지 않으면 상피를 손상할 수 있다. 스파튜라를 사용하는 방법도 풍부한 검사물을 얻을 수는 있으나 병소를 자극하여 손상을 줄 수 있다.
2. 비산부인과적 세포학적 검사물
채취 방법
① 자연 탈락; 생리적으로 탈락한 세포들 객담 ex) urine, sputum, 복막액
② 인공 탈락; 인위적으로 주사기를 목적 부위에 찔러서 인압에 의해 조직을 얻는다. ex) brush, FNABC
비산부인과적 세포학적 검사물은 산부인과 세포학적 검사와 달리 검사물의 도말은 검사실에서 이루어지며 도말 표본 이외에도 세포 군집절편 (cell block section) 이 진단에 이용 된다.
검사물의 채취 및 도말 표본의 제작
접수▶Smear▶고정▶염색▶검경.
비산부인과적 검사물은 종류가 다양하지만 채취된 검사물은 공통적으로 도 말후 고정되기까지 신선하게 보존되고 유지되어야, 염색이 양호해지고 적합한 검경이 이루어진다.
1. sputum(객담)
객담 검사를 위해서 검사물을 채취하기 전에 반듯이 양치질을 하게 해서 구강 내의 음식물 찌꺼기가 오염되는 것을 방지한다. 이는 검경시 혼동되기때문이다.
객담은 입구가 넓고 뚜껑이 있는 용기를 사용한다.
객담 채취 즉시 검사실로 이송하여야 하며 검사실에서는 접수 즉시 도말 하고 고정액에 넣어야 타액의 소화에 의한 변성을 방지할 수 있다.
방법)
① 검체통에 면봉으로 4부위에서 채취한다.
② 슬라이드에 골고루 펴준다. 2장.
③ alcohol로 고정
④ PAP stain, H&E 염색
2. 체액 (body fluid)
체액의 종류는 늑막액 (pleural fluid), 복수액 (ascites), 심낭액 (pericardia fluid), 관절액 (synovial fluid) cadia fluid (심막액), CSF등이 있다.
채취 즉시 검사실로 이송하여야 한다.
3. urine
배뇨검사에 이용되는 소변은 일상적 배뇨가 아닌 검사 전에 물을 마시게 하고 일정 시간 후에 받은 요를 사용하는 것이 좋다. 그 이유는 세포의 변성을 최대한 막고 병적 세포의 발견율을 최대한 높이기 위해서 이다.
urine-① random(일반뇨); 첫 요는 버리고 중간뇨 받는다.
② 카테라; 요관에 관을 껴놓는다. 방광에서 직접 뺀다.
③ ileal-condite urine ; 방광이 없을 때 회장-대장 부위에 요관 연결
(방 법)
①. 검사실에서는 접수후 2 개의 원심 침전용 원추형 시험관에 분주하여 2500 rpm 에서 10분 원심 침전하고 상층액은 버린다.
② egg albumin 난백 1-2 방울을 넣는다.
③ cytospin 원심력에 의해 slide에 도달된다. 1500rpm/10분
④ 상층액 버리고 세포응집기에 응집시킨다.
⑤ PAP stain, H&E 염색
4. 세포군집 검사
alcohol 에 고정→ 자동침투기(블럭)→ special stain, 일반염색
1) Pap 염색-부인과적 세포검사(urine, 체액 ), 일반염색
2) H-E 염색- 특수염색, FNABC
Pap 염색
1. 고정(95% Alcohol ) 30분
2. 수세( Alcohol제거) 3분
3. 핵염색(H-E 염색;퇴행성) 3분
4. 수세( 기벽에 염색액 제거)
5. 탈색(Hcl ) 8dip
6. 수세(중화) 10분
7. 95% Alcohol 2단계×3분씩
8. Orange G (각화층 염색 ) 4분 - 세포질 염색
9. 95% Alcohol로 두단계로 탈색 8번 dip( Orange G염료 제거)
10. EA 50 3분
Eosin; 표재세포,
bismak brown;기타염색,
light green;중간세포,반기저세포
11. 탈수 (100% Alcohol ) 5단계 2분씩
12 xylene 투명
13. 봉입
14. 검경
기계) autostainer : pap stain 자동염색기
Gram stain
1. 목적
Gram 양성과 음성 구분하기 위하여
2. 원리
세포벽의 두께에 따라 acetone alcohol로 탈색이 되는 것을 gram -,
탈색 안되는 것을 gram +
3. 과정
① 탈 파라핀, 함수, 5분 수세
② Crystal violet 1분
③ 수세
④ iodine(매염작용)
⑤ 수세
⑥ 5% acetone alcohol로 탈색(gram -탈색)
⑦ safranin O(gram -을 적색으로 염색)
⑧ 수세
⑨ picric acetone
⑩ 수세
4. 결과
g+b-자색
g-b-적색
세포질-황색
3. AFB(Acid Fast Bacilli) stain
1. 목적
항상성균 보기위한 염색
2. 원리
항상성균은 염색이 되면 산성인 상태에서 탈색이 안된다
3. 과정
① 탈 파라핀, 함수, 수세 5분
② carbol fuchsin 30분 염색
③ 수세
④ 1% Hcl alcohol 3-4회 dip
⑤ 수세 5분
⑥ 0.2% methlene blue 2-3ch
⑦ 수세
4. 주의사항
조직에서는 carbol fuchsin 염색시 가열을 해주지 않는다.
5. 결과
항상성 간균(AFB)- 밝은 적색
핵, 배경- 청색
Tissue
: epithelial tissue, connective tissue, muscular tissue, nervous tissue.
세포의 수가 일반적으로 많아서 치밀하게 배열하고 있으며, 매우 적은 분량의 간질(coment substance)을 가진다. 상피조직은 신체의 내외 표면을 덮을 뿐만 아니라 선(gland)과 같은 구조물을 만듬.
1. 단층상피(squamous epithelium)
1) 단층평편상피 - 폐포, 신장, 사구체, 심장의 혈관이나 림프관 내벽에 분포.
2) 단층입방형 상피 - 신장 세뇨관에 분포, 분비와 흡수의 기능
3) 단층 원주형 상피 - 위에서 항문까지 소화관에 분포,
흡수와 효소,점액 분비의 기능
4) 위충층 원주형 상피 - 난관, 자궁내경부, 기관지
2. 중층 상피
1) 중층 평편 상피- 구강, 식도, 질, 외경부, 피부등 분포
보호하는 기능.
2) 중층 이행상피 - 신우,요관, 방광, 요도의 일부 점막
방어, 분비기능
3) 중층 원주상피 - 식도에서 위부위, 직장에서 항문까지의 부위
보호기능, 팽창성, 방어기능
(정상 월경 주기의 호르몬의 증감 곡선)
1. Estrogen
-세포를 성숙시키고 모든 평편상피층을 증식시킨다.
2. Progesterone
-vasinal의 표층 세포의 증식을 막고 중간세포의 증식 증가
3. Androgen
-자궁벽에 난자를 부착시켜서 영양을 공급
4. 임신일때는 많은 양의 Progesterone,Estrogen 분비, 주상세포가 많이
보이며 세포 분해 현상 두드러진다.
Diagnosis
1) Old Papanicolau classification
2) Modified Papanicolau classification
3) Richard Class
: 이형성증 및 상피내망의 분류 CIN(cervical intraepithelial neoplasia)
CIN Ⅰ ( = ClassⅢa- mild dysplasia )
CIN Ⅱ ( = ClassⅢb- moderate dysplasia )
CIN Ⅲ ( = ClassⅢc- severe dysplasia 와 Class Ⅳ 가 포함됨.)
4) Bethesta system(3단계)
Ⅰ단계:
sample의 적합성 판단. ( insufficient, sufficient; inadequate,adequate)
Ⅱ단계: 정상,양성변화,비정상 변화
Ⅲ단계: 비정상 변화
세부 진단 혹은 세부 진단을 모를 경우 이상 비정형세포의 종류와 기원만을 표시
방법: ASCUS ( Atypical Squamous Cell Undetermind Significany)
; 질,외경부 기원성 비정형세포
AGCUS ( Atypical Grandular undeternind significancy)
; 내경부, 내막기원성 비정형세포
세부진단을 표시할 경우 아래와 같이 서술
이형성 증식)
:LGSIL ( Low Grande Squamous Intraepithelium Legion)
-경도 이형성증
:HGSIL ( High Grande Squamous Intraepithelium Legion)
-중증도,고도이형성증
상피내암) 편평상피내암, 선상피내암
침 윤 암) 편평세포암 , 선암
진단 분류(Diagnostic classiffication)
1) Class Ⅰ: 정상 세포 형태
1. 무핵세포( Anucleated cell, squamous cell)
방어의 기능이 크다.
모든 피부에 존재 : 가장 얇은 곳 - 입술, 귀두
가장 두꺼운곳 - 발바닥
2.표재세포 (Superficial cell)
ex) 질외경부, 구강점막, 식도, 각막 표면 등.
표재세포는 hormone(estrogen,난소 여포의 granulosa cell이 분비)의 영향 받음.
형태) 호산성, 핵이 있다(검다) , 다각형
N/C : 1∼2 %
3.중간세포 (Intermediate cell)
임신한 경우 progesteron의 지배를 받아 최상층이 된다.( progesteron cell이 라고도 함.)
progesteron- 황체에서 분비, 임신 3개월 이후에는 태반 융모의 영양막 세포 에서 분비
형태) 호염기성, 핵이 커짐,세포질 작아짐, 다각형
4. 방기저 세포 (Parabasal cell)
estrogen, progesteron의 분비저하시기인 소녀, 수유기, 할머니 때는 방기저세포까지 존재. - 노인성 상피, 위축성 상피
형태) 구형, 난원형, 진해보인다. 호염기성(basophil)
N/C ratio : 25∼35 %정도
5. 기저세포
정상도말 상에서 탈락 될수도 있으나 본래의 형태를 관찰할 수 없음.
자궁경부(cervix)
①자궁외경부(exocervix)
: 비각화성 중층 편평상피(방어)가 정상.
②자궁내경부(endocervix)
: 키가큰 원주상피
단층원주상피(Squamous Colmnar Epithelium: SCE) 로 구성됨이 정상
배상세포(Goblet cell)-hormone의 영향을 받아 세포질에 점액(mucus)
으로 가득참, 뚱뚱한 원주세포 모여있을 때 벌집 모양
③자궁내막
: 키작은 원주상피 ,포도형태(grape)로 관찰됨
세포질의 형태와 배열이 불규칙하고 단층이 아니라 중첩(overlaping)되어 있다.
Exodus(이주현상) : 생리가 끝나고 6∼10일에 나온다.
망가진 자궁내막이 증식될 때 보인다.
6 .편평세포의 변형
①주상세포( navicular cell)
: Progesteron의 영향 progesteron의 증가하면 도말상에 중간세포의 증가로 중간세포 group이 생긴다. 최고치가 되면 rolling현상이 보이며 핵이 가장자리로 밀림(핵 편재) 세포질에 당원이 찬다.이를 주상세포( navicular cell) 유산균(Lactobacillus로 상재균)이 보임, 이균이 세포질과 당원을 소화하여 핵만 남게된다.(나핵)
②안드로젠 세포
안드로젠; 부신에서 나오는 호르몬으로 남성, 여성 호르몬 역할을 해준다.
그러나 완벽한 역할은 하지 못한다.
ex) 분비 : 평상시는 생식기에 영향력을 발휘 못하다가 난소가 없는 경우나
노인에서 부신에서 분비되는 안드로젠의 여향을 받아 방기저세포에
노랑색의 당원이 찬다.
7. 기타세포
① 진주 (핵이 많다.) ; 양파, 나이테, 소용돌이 모양. 호산성 세포질의 세포군집.
편평상피에서 세포들이 자극에 의해 편평세포가 좁은 공간내에서 빠른 증식이
일어난 현상으로 핵은 농축되어 길게 보임.
② 조직구 ; kidney 모양, 땅콩 모양 ,
세포질이 스폰지 같아 보인다.( 다수의 작은 공포가 차있다.)
용해소체(lysosome)가 존재 -어떤 물질(이물질)이 들어오면 잡아먹는다.
③ 다핵성 거대 조직구 (multinucleated giant histiocyte): 변형 조직구
어떤 이물질(foreign debris)이 조직구에 탐식되면 조직구는 여러 핵을
가지게 된다. 큰 조직구의 세포질내에 두 개이상의 많은 핵들이 나타나서
거대 세포(giant cell)가 됨.
Lang hans 조직구: 변형 조직구
핵의 배열이 O, C, U형, 말발굽형(horse nail)으로
결핵, 매독, 이물질 반응 등에서 나타나는 조직구
2) Class Ⅱ : Benign atypia(비정형 양성)
1. Candida albicans
⇒질염의 주원인체
Pap stain상에서 잘보임 : 5∼8μ크기의 Conidia 가 주로 관찰되며
hyphae (pseudohyphae) 가 보임.
2. Trichomonas
⇒ 다수의 WBC 출현, 바탕이 지저분함(dirty background)
충체의 확인 - 서양배모양의 희미한 몸체, 감씨모양의 길죽한 핵
머리카락 모양의 Leptothrix sp.와 같이 보인다.
3. Condyloma
⇒ HPV(Human Papilloma Virus)
공동세포(koilocyte) 출현
양성인 papilloma에서 cancer 로 될 가능성 있음.
4. Herpes
⇒ Herpes simplex virus (단순포진 바이러스)
다핵성 거대세포.
핵이 밀착되어 보인다. (moulding)
chromatin이 핵막에 몰려 핵막이 두껍워짐.
핵내에는 핵즙만 남아 젖빛유리 색으로 보임.
좀더 진행된 것은 핵내 봉임체가 보임.
5. Neisseria gonorrhoeae (임균)
⇒ neutrophil 세포질내에 kidney shape의 쌍구균(diplococci)들이 보임.
6. Hemophilus
⇒ Clue cell 이 보임- 중간세포의 세포질내에 Hemophilus 균이 보임.
7. 화생세포(metaplastic cell)
⇒원주세포가 자극을 받으면 편평세포화 된다.
거미세포(화생세포), 위족이 보인다.
8. Chlamydia
⇒ 화생세포의 세포질 내에 공포형성.
공포내에서 증식하여 봉입체 형성.(과립)
3) Class Ⅲ
: Dysplasia(이형성증식), 암의 전단계
⇒ 세포질은 정상이며 핵은 1단계 아래의 정상핵의 2-3배크기로 커지
고 chromatin은 농축됨. (핵의 이상)
4) Class Ⅳ
상피내암(CIS: carcinoma in situ) - 상피에 암이 꽉차서 기저막 뚫고
들어감. 고도 이형성증과 비슷하다.
5) Class Ⅴ
1. 기저막 침범
2. 침윤성 악성 종양(invasive)
: 침윤성 편평상피세포 암(invasive squamous cell carcinoma)
⇒ 핵의 농축화, 핵막 불규칙 대소부동, 다형태성이 관찰되고 농염.
- 각화성 편평세포암: eosinophilic하게 염색, 올챙이, 방추형 세포와
악성진주.
침윤성 원주상피세포암(침윤성 선암)(invasive adenocarcinoma)
⇒ 전체적으로 공모양, 장미꽃모양의 암세포 집단
세포학은 세포를 기능적, 형태적으로 연구하는 학문
세포검사는
① 환자에게 부담이 덜하다(심적, 경제적)
② 신속한,가격저렴, 간단한 진단법.
③ 광범위한 검사할 수 있다. 탈락세포 볼 수 있다.
ex) urine은 신장에서 요관까지, 객담은 구강에서 폐까지 광범위하게 조사한다. 이에 반해 조직은 검체체취가 힘들다.
④ 병소부위를 놓칠수 있기 때문에 정확한 진단이 될 수 없다.
즉, 최종 진단은 조직에서 세포검사는 조직검사의 전검사단계이다.
【 검사물의 채취법】
1. 산부인과적 세포검사
검사물을 채취하고 도말할 때 가장 중요한 사항은 검사물이 바뀌는 것에 주의해야 한다. 검사물 채취 시에는 각종 시약에서 지워지지 않는 연필이나 다이아몬드 표식물 (diamond marker) 로 슬라이드 한쪽에 환자의 이름, 번호 등의 인식을 즉시 표시하여야 한다.
산부인과적 검사 표본
부인과적 검사물의 채취와 도말은 주로 임상 의사에 의해서 이루어지며 일반적인 정규 검진의 일환으로 질의 후원개 (posterior fornix) 와 편평-원주 접합부 (squamo-columnar junction)를 포함하는 변형대(transformation zone) 에서 채취하는 방법이 있다.
특별한 목적에 따라 자궁내경부 천자도말 (endocervical aspiration smear) 혹은 자궁 내막 흡인 (endometrial aspiration) 과 외음부 직접 찰과 도말 (direct scraping smear) 이 있다.
도말시 가장 중요한 사항은 Pap 염색을 위한 검사물은 절대로 공기 중에 건조시키지 말아야 한다. 건조되면 세포의 크기가 늘어나고 염색성이 약해져 형태학적 변화의 판별이 불가능해지기 때문이다. 따라서 공기 건조를 방지하기 위하여 도말 즉시 고정액에 담그는 작업이 우선이다.
부인과적 검사물의 채취시 중요하게 생각하여야 할 또 하나의 사항은 환자의 정보를 의뢰서에 기록하여야 한다는 것이다. 여성의 월경 주기에 대한 정보 등은 세포학적 진단에 많은영향을 미치기 때문이다. .
(1) 검사물 채취 일자 (date of procedure)
(2) 환자 연령 및 성별 (age & sex)
(3) 최종 월경기 (last menstrual period, LMP)
(4) 검사물 채취 부위 (source & site of origin)
V ; vagina
C ; cervix
E ; endocervix
EN ; endometrium
(5) 검사물 채취 방법 (method of collection)
(6) 증상 (symptoms)
(7) 병력 및 치료력 (history & treatment)
(8) 호르몬제 투약 여부 (hormonal therapy)
(9) 과거조직 세포학적 검사 여부 (previous
examination)
(10) 임상 진단 (clinical diagnosis)
부인과적 검사물의 채취시 사용되는 도구로서 슈파트라 (spatula) 혹은 설압자, 면봉 및 솔(brush) 들이 있는데, 최근에는 면봉을 사용하지 않고 있다 . 그 이유로서 비흡수성 면봉일지라도 면 섬유가 슬라이드 위에 오염되는 경향이 많고 세포가 섬유에 부착되거나 수분과 함께 흡수되어 도말 되는 세포수가 감소되기 때문이다.
최근에 유용성 있게 많이 사용되는 도구는 솔로서 풍부한 검사물을 얻을 수 있는 장점은 있으나 부드럽게 사용하지 않으면 상피를 손상할 수 있다. 스파튜라를 사용하는 방법도 풍부한 검사물을 얻을 수는 있으나 병소를 자극하여 손상을 줄 수 있다.
2. 비산부인과적 세포학적 검사물
채취 방법
① 자연 탈락; 생리적으로 탈락한 세포들 객담 ex) urine, sputum, 복막액
② 인공 탈락; 인위적으로 주사기를 목적 부위에 찔러서 인압에 의해 조직을 얻는다. ex) brush, FNABC
비산부인과적 세포학적 검사물은 산부인과 세포학적 검사와 달리 검사물의 도말은 검사실에서 이루어지며 도말 표본 이외에도 세포 군집절편 (cell block section) 이 진단에 이용 된다.
검사물의 채취 및 도말 표본의 제작
접수▶Smear▶고정▶염색▶검경.
비산부인과적 검사물은 종류가 다양하지만 채취된 검사물은 공통적으로 도 말후 고정되기까지 신선하게 보존되고 유지되어야, 염색이 양호해지고 적합한 검경이 이루어진다.
1. sputum(객담)
객담 검사를 위해서 검사물을 채취하기 전에 반듯이 양치질을 하게 해서 구강 내의 음식물 찌꺼기가 오염되는 것을 방지한다. 이는 검경시 혼동되기때문이다.
객담은 입구가 넓고 뚜껑이 있는 용기를 사용한다.
객담 채취 즉시 검사실로 이송하여야 하며 검사실에서는 접수 즉시 도말 하고 고정액에 넣어야 타액의 소화에 의한 변성을 방지할 수 있다.
방법)
① 검체통에 면봉으로 4부위에서 채취한다.
② 슬라이드에 골고루 펴준다. 2장.
③ alcohol로 고정
④ PAP stain, H&E 염색
2. 체액 (body fluid)
체액의 종류는 늑막액 (pleural fluid), 복수액 (ascites), 심낭액 (pericardia fluid), 관절액 (synovial fluid) cadia fluid (심막액), CSF등이 있다.
채취 즉시 검사실로 이송하여야 한다.
3. urine
배뇨검사에 이용되는 소변은 일상적 배뇨가 아닌 검사 전에 물을 마시게 하고 일정 시간 후에 받은 요를 사용하는 것이 좋다. 그 이유는 세포의 변성을 최대한 막고 병적 세포의 발견율을 최대한 높이기 위해서 이다.
urine-① random(일반뇨); 첫 요는 버리고 중간뇨 받는다.
② 카테라; 요관에 관을 껴놓는다. 방광에서 직접 뺀다.
③ ileal-condite urine ; 방광이 없을 때 회장-대장 부위에 요관 연결
(방 법)
①. 검사실에서는 접수후 2 개의 원심 침전용 원추형 시험관에 분주하여 2500 rpm 에서 10분 원심 침전하고 상층액은 버린다.
② egg albumin 난백 1-2 방울을 넣는다.
③ cytospin 원심력에 의해 slide에 도달된다. 1500rpm/10분
④ 상층액 버리고 세포응집기에 응집시킨다.
⑤ PAP stain, H&E 염색
4. 세포군집 검사
alcohol 에 고정→ 자동침투기(블럭)→ special stain, 일반염색
1) Pap 염색-부인과적 세포검사(urine, 체액 ), 일반염색
2) H-E 염색- 특수염색, FNABC
Pap 염색
1. 고정(95% Alcohol ) 30분
2. 수세( Alcohol제거) 3분
3. 핵염색(H-E 염색;퇴행성) 3분
4. 수세( 기벽에 염색액 제거)
5. 탈색(Hcl ) 8dip
6. 수세(중화) 10분
7. 95% Alcohol 2단계×3분씩
8. Orange G (각화층 염색 ) 4분 - 세포질 염색
9. 95% Alcohol로 두단계로 탈색 8번 dip( Orange G염료 제거)
10. EA 50 3분
Eosin; 표재세포,
bismak brown;기타염색,
light green;중간세포,반기저세포
11. 탈수 (100% Alcohol ) 5단계 2분씩
12 xylene 투명
13. 봉입
14. 검경
기계) autostainer : pap stain 자동염색기
Gram stain
1. 목적
Gram 양성과 음성 구분하기 위하여
2. 원리
세포벽의 두께에 따라 acetone alcohol로 탈색이 되는 것을 gram -,
탈색 안되는 것을 gram +
3. 과정
① 탈 파라핀, 함수, 5분 수세
② Crystal violet 1분
③ 수세
④ iodine(매염작용)
⑤ 수세
⑥ 5% acetone alcohol로 탈색(gram -탈색)
⑦ safranin O(gram -을 적색으로 염색)
⑧ 수세
⑨ picric acetone
⑩ 수세
4. 결과
g+b-자색
g-b-적색
세포질-황색
3. AFB(Acid Fast Bacilli) stain
1. 목적
항상성균 보기위한 염색
2. 원리
항상성균은 염색이 되면 산성인 상태에서 탈색이 안된다
3. 과정
① 탈 파라핀, 함수, 수세 5분
② carbol fuchsin 30분 염색
③ 수세
④ 1% Hcl alcohol 3-4회 dip
⑤ 수세 5분
⑥ 0.2% methlene blue 2-3ch
⑦ 수세
4. 주의사항
조직에서는 carbol fuchsin 염색시 가열을 해주지 않는다.
5. 결과
항상성 간균(AFB)- 밝은 적색
핵, 배경- 청색
Tissue
: epithelial tissue, connective tissue, muscular tissue, nervous tissue.
세포의 수가 일반적으로 많아서 치밀하게 배열하고 있으며, 매우 적은 분량의 간질(coment substance)을 가진다. 상피조직은 신체의 내외 표면을 덮을 뿐만 아니라 선(gland)과 같은 구조물을 만듬.
1. 단층상피(squamous epithelium)
1) 단층평편상피 - 폐포, 신장, 사구체, 심장의 혈관이나 림프관 내벽에 분포.
2) 단층입방형 상피 - 신장 세뇨관에 분포, 분비와 흡수의 기능
3) 단층 원주형 상피 - 위에서 항문까지 소화관에 분포,
흡수와 효소,점액 분비의 기능
4) 위충층 원주형 상피 - 난관, 자궁내경부, 기관지
2. 중층 상피
1) 중층 평편 상피- 구강, 식도, 질, 외경부, 피부등 분포
보호하는 기능.
2) 중층 이행상피 - 신우,요관, 방광, 요도의 일부 점막
방어, 분비기능
3) 중층 원주상피 - 식도에서 위부위, 직장에서 항문까지의 부위
보호기능, 팽창성, 방어기능
(정상 월경 주기의 호르몬의 증감 곡선)
1. Estrogen
-세포를 성숙시키고 모든 평편상피층을 증식시킨다.
2. Progesterone
-vasinal의 표층 세포의 증식을 막고 중간세포의 증식 증가
3. Androgen
-자궁벽에 난자를 부착시켜서 영양을 공급
4. 임신일때는 많은 양의 Progesterone,Estrogen 분비, 주상세포가 많이
보이며 세포 분해 현상 두드러진다.
Diagnosis
1) Old Papanicolau classification
2) Modified Papanicolau classification
3) Richard Class
: 이형성증 및 상피내망의 분류 CIN(cervical intraepithelial neoplasia)
CIN Ⅰ ( = ClassⅢa- mild dysplasia )
CIN Ⅱ ( = ClassⅢb- moderate dysplasia )
CIN Ⅲ ( = ClassⅢc- severe dysplasia 와 Class Ⅳ 가 포함됨.)
4) Bethesta system(3단계)
Ⅰ단계:
sample의 적합성 판단. ( insufficient, sufficient; inadequate,adequate)
Ⅱ단계: 정상,양성변화,비정상 변화
Ⅲ단계: 비정상 변화
세부 진단 혹은 세부 진단을 모를 경우 이상 비정형세포의 종류와 기원만을 표시
방법: ASCUS ( Atypical Squamous Cell Undetermind Significany)
; 질,외경부 기원성 비정형세포
AGCUS ( Atypical Grandular undeternind significancy)
; 내경부, 내막기원성 비정형세포
세부진단을 표시할 경우 아래와 같이 서술
이형성 증식)
:LGSIL ( Low Grande Squamous Intraepithelium Legion)
-경도 이형성증
:HGSIL ( High Grande Squamous Intraepithelium Legion)
-중증도,고도이형성증
상피내암) 편평상피내암, 선상피내암
침 윤 암) 편평세포암 , 선암
진단 분류(Diagnostic classiffication)
1) Class Ⅰ: 정상 세포 형태
1. 무핵세포( Anucleated cell, squamous cell)
방어의 기능이 크다.
모든 피부에 존재 : 가장 얇은 곳 - 입술, 귀두
가장 두꺼운곳 - 발바닥
2.표재세포 (Superficial cell)
ex) 질외경부, 구강점막, 식도, 각막 표면 등.
표재세포는 hormone(estrogen,난소 여포의 granulosa cell이 분비)의 영향 받음.
형태) 호산성, 핵이 있다(검다) , 다각형
N/C : 1∼2 %
3.중간세포 (Intermediate cell)
임신한 경우 progesteron의 지배를 받아 최상층이 된다.( progesteron cell이 라고도 함.)
progesteron- 황체에서 분비, 임신 3개월 이후에는 태반 융모의 영양막 세포 에서 분비
형태) 호염기성, 핵이 커짐,세포질 작아짐, 다각형
4. 방기저 세포 (Parabasal cell)
estrogen, progesteron의 분비저하시기인 소녀, 수유기, 할머니 때는 방기저세포까지 존재. - 노인성 상피, 위축성 상피
형태) 구형, 난원형, 진해보인다. 호염기성(basophil)
N/C ratio : 25∼35 %정도
5. 기저세포
정상도말 상에서 탈락 될수도 있으나 본래의 형태를 관찰할 수 없음.
자궁경부(cervix)
①자궁외경부(exocervix)
: 비각화성 중층 편평상피(방어)가 정상.
②자궁내경부(endocervix)
: 키가큰 원주상피
단층원주상피(Squamous Colmnar Epithelium: SCE) 로 구성됨이 정상
배상세포(Goblet cell)-hormone의 영향을 받아 세포질에 점액(mucus)
으로 가득참, 뚱뚱한 원주세포 모여있을 때 벌집 모양
③자궁내막
: 키작은 원주상피 ,포도형태(grape)로 관찰됨
세포질의 형태와 배열이 불규칙하고 단층이 아니라 중첩(overlaping)되어 있다.
Exodus(이주현상) : 생리가 끝나고 6∼10일에 나온다.
망가진 자궁내막이 증식될 때 보인다.
6 .편평세포의 변형
①주상세포( navicular cell)
: Progesteron의 영향 progesteron의 증가하면 도말상에 중간세포의 증가로 중간세포 group이 생긴다. 최고치가 되면 rolling현상이 보이며 핵이 가장자리로 밀림(핵 편재) 세포질에 당원이 찬다.이를 주상세포( navicular cell) 유산균(Lactobacillus로 상재균)이 보임, 이균이 세포질과 당원을 소화하여 핵만 남게된다.(나핵)
②안드로젠 세포
안드로젠; 부신에서 나오는 호르몬으로 남성, 여성 호르몬 역할을 해준다.
그러나 완벽한 역할은 하지 못한다.
ex) 분비 : 평상시는 생식기에 영향력을 발휘 못하다가 난소가 없는 경우나
노인에서 부신에서 분비되는 안드로젠의 여향을 받아 방기저세포에
노랑색의 당원이 찬다.
7. 기타세포
① 진주 (핵이 많다.) ; 양파, 나이테, 소용돌이 모양. 호산성 세포질의 세포군집.
편평상피에서 세포들이 자극에 의해 편평세포가 좁은 공간내에서 빠른 증식이
일어난 현상으로 핵은 농축되어 길게 보임.
② 조직구 ; kidney 모양, 땅콩 모양 ,
세포질이 스폰지 같아 보인다.( 다수의 작은 공포가 차있다.)
용해소체(lysosome)가 존재 -어떤 물질(이물질)이 들어오면 잡아먹는다.
③ 다핵성 거대 조직구 (multinucleated giant histiocyte): 변형 조직구
어떤 이물질(foreign debris)이 조직구에 탐식되면 조직구는 여러 핵을
가지게 된다. 큰 조직구의 세포질내에 두 개이상의 많은 핵들이 나타나서
거대 세포(giant cell)가 됨.
Lang hans 조직구: 변형 조직구
핵의 배열이 O, C, U형, 말발굽형(horse nail)으로
결핵, 매독, 이물질 반응 등에서 나타나는 조직구
2) Class Ⅱ : Benign atypia(비정형 양성)
1. Candida albicans
⇒질염의 주원인체
Pap stain상에서 잘보임 : 5∼8μ크기의 Conidia 가 주로 관찰되며
hyphae (pseudohyphae) 가 보임.
2. Trichomonas
⇒ 다수의 WBC 출현, 바탕이 지저분함(dirty background)
충체의 확인 - 서양배모양의 희미한 몸체, 감씨모양의 길죽한 핵
머리카락 모양의 Leptothrix sp.와 같이 보인다.
3. Condyloma
⇒ HPV(Human Papilloma Virus)
공동세포(koilocyte) 출현
양성인 papilloma에서 cancer 로 될 가능성 있음.
4. Herpes
⇒ Herpes simplex virus (단순포진 바이러스)
다핵성 거대세포.
핵이 밀착되어 보인다. (moulding)
chromatin이 핵막에 몰려 핵막이 두껍워짐.
핵내에는 핵즙만 남아 젖빛유리 색으로 보임.
좀더 진행된 것은 핵내 봉임체가 보임.
5. Neisseria gonorrhoeae (임균)
⇒ neutrophil 세포질내에 kidney shape의 쌍구균(diplococci)들이 보임.
6. Hemophilus
⇒ Clue cell 이 보임- 중간세포의 세포질내에 Hemophilus 균이 보임.
7. 화생세포(metaplastic cell)
⇒원주세포가 자극을 받으면 편평세포화 된다.
거미세포(화생세포), 위족이 보인다.
8. Chlamydia
⇒ 화생세포의 세포질 내에 공포형성.
공포내에서 증식하여 봉입체 형성.(과립)
3) Class Ⅲ
: Dysplasia(이형성증식), 암의 전단계
⇒ 세포질은 정상이며 핵은 1단계 아래의 정상핵의 2-3배크기로 커지
고 chromatin은 농축됨. (핵의 이상)
4) Class Ⅳ
상피내암(CIS: carcinoma in situ) - 상피에 암이 꽉차서 기저막 뚫고
들어감. 고도 이형성증과 비슷하다.
5) Class Ⅴ
1. 기저막 침범
2. 침윤성 악성 종양(invasive)
: 침윤성 편평상피세포 암(invasive squamous cell carcinoma)
⇒ 핵의 농축화, 핵막 불규칙 대소부동, 다형태성이 관찰되고 농염.
- 각화성 편평세포암: eosinophilic하게 염색, 올챙이, 방추형 세포와
악성진주.
침윤성 원주상피세포암(침윤성 선암)(invasive adenocarcinoma)
⇒ 전체적으로 공모양, 장미꽃모양의 암세포 집단
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