LAP Score(Leukocyte alkaline phosphatase
stain)
1. 검사명 : LAP Score(Leukocyte Alkaline Phosphatase Stain)
2. 검사원리 : 기질인 Naphthol AS-BI phosphate는 알카리성 인산요소에 의해
가수분해되어 phosphate + arynaphtholamide를 형성하고 arynaphtholamide는
diazonium salt인 fast red violet salt와 결합하여 호중구내 alkaline
phosphatase의 활성도에 따라 불용성인 붉은 침전물을 형성한다.
3. 환자 검체준비 : 환자가 직접 혈액학계에 내려와 손끝에서 혈액을 채혈한 후
slide smear를 3장 준비한다.
4. 검체 적합성 판정기준 : 신선한 말초혈액 도말표본을 말린 뒤 즉시 고정하며
보관 할때는 고정이 끝난 뒤 3 시간정도 말린 후 -20℃에 보관한다.
5. 정도관리 : Neutrophil이 많은 slide를 positive control로 사용한다. 특히(
임산부의 말초혈액)이 좋다.
6. 시약
1) 고정액 : citrated buffered acetone(60%) 냉장보관
(1) 0.03M sod. citrate(8.82g/L), 32ml + 0.03M citric acid 168ml
(2) acetone : 150ml
2) 0.2M propanediol stock buffer sol.(냉장보관)
(1) 2-amino-2-methyl-1,3-propanediol: 10.5g
(2) DW : 500ml
3) 0.05M propanediol working sol.(pH 9.4 - 9.6)
(1) 0.2M propanediol stock buffer sol.: 250ml
(2) 0.1M HCl(conc Hcl 8.4 ml/L): 50ml
(3) DW: 1000ml 냉장보관 했다가 사용시 실온으로 !
4) 염색액
(1) Naphthol AS-BI phosphate: 5mg
(2) N.N-Dimethylformamide: 0.3ml
이때 물기가 있으면 안되고 충분히 용해되어야 염색이 된다.
(3) 0.05M propanediol working buffer sol.: 60ml
(4) Fast red violet salt LB : 30mg 반드시 여과( filteration )를 한다.
5) 대조 염색액 : Mayer hematoxylin( 1g hematoxylin /50ml DW )
a.Hematoxyline .................... 1g + D.W .................. 500ml
(Heat just to boilling, add another 500ml D.W.)
Sod. iode .............. 0.2g + Amm. Pot. sulfate ............. 50g
( Store in brown bottle at room temp. and filter before use)
b. 1% Methylene blues ............ 1g + D.W. to 100ml
7. 장비 : Microscope
8. 검사방법
1) 신선한 말초혈액이나 heparin으로 처리된 혈액으로 슬라이드를 3장씩 만든다
2) 0 - 4℃의 formalin fixative sol에 30초 , aceton fixative sol에 실온에서 30
초간 고정한다.
3) 흐르는 물에 세척하고 30-60 초간 air dry 시킨다.
4) 염색액에 슬라이드를 넣고10 분간 실온에 방치한다.
5) 흐르는 물에 1분간 세척한다.
6) 37℃에서 정확히 30분간 신선한 substrate mixture에 incubation 한다.
7) 30-60초 흐르는 물에 세척
8) 여과한 염색액(hematoxylin)으로 6 분간 대조염색한다.
9) 흐르는 물에 1-2 분간 세척한다.
10) Air dry 시킨 후 봉입하여 현미경으로 관찰한다.
9. 결과 및 보고방법 : 얇게 도말된 부분에서 neutrophil이나 band를 찾아서 100 count동안 LAP score를 계산하는데 0에서 4까지 등급을 나누어 계산한 후 총 합계를 보고하며 그 기준은 다음 표와 같다.
Table. Characteristics of Scoring Precipitated Azo Dye in Cytoplasm
Score reading |
Amount |
Size of granules |
Intensity of staining |
Cytoplasm |
0 |
none |
N/A |
none |
none |
1 |
one forth |
small |
faint to moderate |
colorless to pale blue |
2 |
one half |
small |
moderate |
colorless to pale blue |
3 |
three quarter |
mediun to large |
strong |
colorless to pale blue |
4 |
full( all ) |
medium and large |
brilliant |
not visible |
10. 참고치 : 13-130
11. 검사결과의 임상적 의의
1) 증가 : polycythemia vera, a variety of malignancies, pregnancy,
infections/inflammatory disorders, emotional stress, etc...
2) 감소 : paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, chronic myelogenous leukemia
12. 참고문헌
1) Li CY, Yam LT, Sun T : Cytochemistry(pp. 7-19), Cytology and
Cytochemistry(pp. 112-127) in Modern Modalities for the Diagnosis of
Hematologic Neoplasms, Igaku-shoin, New York, Tokyo, 1996
2) Hyun BH, Gulati GL, Ashiton JK : Special stains in Hematology(pp. 45-66)
in Color Atlas of Clinical Hematology, New York and Tokyo, 1986
3) Williams WJ, Beutler E, etc... : Hematology, 3rd ed., New York,
MacGraw-Hill, 1986, pp. 1746-1747