[MD]2020 MDEET 29번 : 염색질면역침전법, Protein A, 단백질 상호작용

[홍장군고양이]

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년도 시험명 번호 : 주제
예) 2015 MD 2번 : 삼투압

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(가) 포름알데히드는 DNA와 단백질의 결합이 그대로 고정되도록 한다.

(나) 항-X 항체는 단백질 X에 결합하고, 항-Y 항체는 단백질 Y에 결합한다.

두 항체 중 한 가지만 먼저 사용한다.

Protein A는 항체의 Fc부위에 결합한다.

따라서 항체와 결합된 단백질은 침전된다.

(다) 염색질 복합체를 분석하기 위한 기초 과정이다.

(라) (다)에서 분리한 염색질에 다시 항체를 처리한다.

이전에 처리했던 것과는 다른 종류의 항체를 처리하는 것을 표로 확인할 수 있다.

(마)-(바) DNA만 분리하여 증폭해보면서 결과를 분석한다.

M을 처리한 실험군에서는 DNA PCR의 결과물이 나타나지 않은 경우가 있다.

M은 DNA와 어떤 단백질(X 혹은 Y)의 결합을 해체하는 기능을 하거나

혹은 단백질 X와 Y 사이의 결합을 해체하는 기능을 할 것이다.

만약 M이 DNA와 단백질 사이의 결합을 해체한다면,

M 처리 시 PCR 결과는 항상 나타나지 않아야 한다.

하지만 PCR이 나타난 경우도 존재한다.

따라서 M은 X와 Y 사이의 결합을 해체하는 역할을 한다고 추론할 수 있다.

M을 처리한 후, 항-X → 항-Y를 차례로 실험한 조건에서 DNA는 처음부터 없었다.

DNA가 침전되지 못하였으므로 Y는 DNA와 결합되어 있고,

항-X에 의해 X만 먼저 떨어져 나온 것이다.

반면 M을 처리한 후, 항-Y → 항-X를 차례로 실험한 조건에서 DNA는 나중에 없어졌다.

Y가 DNA에 결합되어 있기 때문에 1차 침전물에 DNA도 같이 딸려온 것이다.

그림으로 그리면 아래와 같다.

ㄱ. M이 없으면 X와 Y는 결합되어 있기 때문에 항상 침전물에 DNA가 존재한다. O

ㄴ. M 처리 & 항-Y → 항-X 처리한 경우에도 DNA는 1차 침전물에서 나타났다. O

ㄷ. M은 X와 Y가 서로 결합하는 것을 막는다.

만약 Y와 ⓐ 사이의 결합을 막았다면 M 처리 시 침전물에 DNA가 섞일 수 없다. X

답 : 3

[카푸라떼]

선생님
M을 처리한 후, 항-X → 항-Y를 차례로 실험한 조건에서 DNA는 처음부터 없었다.
이 말에서 DNA 는 처음부터 없었다는게 무슨말인지 잘모르겠습니다 ㅠㅠ

이 조건에서 M처리시 X와 Y사이의 결합이 해체되고 1차침전물에선 밴드가 나타나지 않는건 이해가 가는데
2차침전물에서도 x인것이 잘 이해가 안갑니다
XY사이의 결합이 해체되면 Y는 DNA랑 결합이 되어 있어서 밴드가 나타나야하는거 아닌가요??

[홍장군고양이]

1차 침전물부터 DNA가 없었다는 뜻입니다.

DNA가 포함되지 않은 1차 침전물만 걸러내어 2차 침전을 수행하므로 DNA가 검출될 수 없습니다.

[카푸라떼]

홍장군고양이 아 이해가됬습니다
감사합니다!!

[어머니~호구마가아니라호박고구마요]

쌤~~! 여기서 포름알데히드가 단백질 x와 y간의 결합도 고정하나요?? 아니면 염색질과 단백질 사이 결합만 고정하나요??

만약 x,y사이 결합이 고정이 안된다면, 실험과정 중에 얘네가 분리되었다가도 결합할 수 있다고 보면 될까요??