한국식품정보원 대전교육장 9층에는 HPLC를 이용하여 실습을 할 수 있는 분석기기실 이 자리하고 있습니다.
1. HPLC를 사용하는 QC 담당자
2. 식품 및 제약업계 취업준비생
3. 분석 관련 학과 재학생
등을 대상으로 교육이 진행되고 있어요.
한국식품정보원의 HPLC 분석 기초 교육은 이론과 실습수업이 병행 하여 진행이 되고 있습니다.
HPLC의 원리를 잘 알아야 최고의 분석가가 될 수 있기 때문에!
기초부터 차근차근 이론 수업이 진행이 되는데요~
이론수업 후에 모든 교육생들이 직접 용매, 표준품, 샘플 등을 제조해보고 기기를 직접 다뤄볼 수 있는 실습 시간을 가진답니다.
먼저 이론 수업이 어떻게 진행 되는지 간단하게 한 번 볼까요?
분석기기실 내부에는 Agilent 사의 HPLC 기기가 자리하고 있었어요!
▼▽▼▽ 챠라란 !! ▼▽▼▽
개인별 실습이 이루어지기 전에 먼저 HPLC의 기본 이론에 대한 강의가 진행 되었습니다.
1. 크로마토그래피란 뭘까요?
혼합물인 시료를 고정상인 컬럼과 이동상 간의 물리 화학적인 차이를 이용하여
각각의 성분으로 분리하고 최적의 검출기를 이용하여 검출하여 정량, 정성하는 분석 방법
이라고 하네요!
여기서 의미하는 물리화학적인 차이는 분배, 흡착, 이온교환, 친화, 크기배제 등을 의미합니다.
그 중 HPLC는 High Performance Liquid Chromatography의 약자로
액체크로마토그래피를 칭하며 주로 분석대상물질이 유기물입니다.
이동상이 액체이며 용해성이 있는 시료를 분석하기위해 사용됩니다.
사실 모든 크로마토그래피의 원리는 비슷해요! (소근소근)
(번외로 GC는 무엇을 뜻할까요?
Gas Chromatography 이며 이동상은 기체! 그리고 휘발성이 있는 시료를 분석할 때 사용됩니다.
그외에 IC, SEC 모두 비슷한 원리이며 서로 다른 물리화학적인 차이만을 이용할 뿐이랍니다 !)
IC : Ion exchange Chromatography -> 양이온이나 음이온의 시료가 상대 이온과의 경쟁으로 교환이 일어나 고정상에 분포 SEC : Size Exclusion Chromatography -> 겔의 다공성 크기에 시료 분자의 크기에 따라 투과성에 의해 분리하는경우. 즉 분자가 큰 것이 먼저, 작은 것이 나중에 용리됨 |
혹시 순상? 역상? 에 대해서 들어보셨나요?
주로 '컬럼'을 지칭할 때 사용하는 단어인데 사실 크로마토그래피의 원리 중 하나인 '극성'과 관련이 있습니다.
먼저 극성이란 뭘까요?
* polarity 분자 또는 화학결합에서 전하분포(電荷分布)가 불균일할 때, 즉 분자 내에서 양전하(陽電荷)와 음전하(陰電荷)의 무게중심이 일치하지 않는 것을 극성을 가진다고 하고, 극성을 가지지 않는 것을 무극성이라 한다. * 알코올·암모니아·물 등은 극성이지만 메탄·벤젠·이산화탄소 등은 무극성이다. * 유기화합물에서 분자 내에 산소·질소·할로겐 등을 함유하는 것은 극성을 가지는 예가 많다. (출처 : 사이언스올 과학사전) |
극성에 대한 개념을 이해하셨으면 아래 개념이 더 쉽게 이해될거에요.
순상(Normal phase) : 고정상(컬럼)이 이동상(용매)보다 극성이 강한 경우. 비극성 용매 사용 역상(Reverse Phase) : 이동상(용매)이 고정상(컬럼)보다 극성이 강한 경우. 극성 용매 사용 |
2. HPLC는 어떻게 구성되어 있을까요?
기기의 기본 구성에 대해 알아보았습니다.
기기는 크게 펌프 (degasser 포함)와 UV detector (검출기), injecter (시료 주입 장치), 컬럼으로 구성되어 있었어요.
여러분들께서 궁금해하실까봐 교육운영팀에서 준비했습니다 !
한국식품정보원에서 보유한 HPLC 기기의 내외부 사진 입니다~
▼▽외부▼▽
▼▽내부▼▽
위 사진들을 참고하여 아래의 간단한 설명을 읽어주세요~~
2-1. 펌프
펌프는 용매가 들어있는 bottle (메디아병)로부터 용매를 끌어서 시료 주입기로 밀어주는 역할을 합니다.
이 펌프를 이용하여 유속과 압력을 유지하며 isocratic 부터 gradient까지 줄 수 있습니다.
▼▽▼HPLC 펌프 사진▽▼▽
왼쪽 아래에 purge를 위한 펌프
각 flow method에는 장단점이 있답니다!
isocratic과 gradient의 차이 궁금하시죠??
궁금하시면 한국식품정보원을 찾아주세요~~~~
여기서 잠깐!
degasser 는 용리액에 존재하는 공기를 제거하기 위한 기기 입니다.
용매에 공기가 존재하면 펌프에 의해 시료가 불안정하게 이송됩니다.
따라서 degassing과정을 통해 이동상의 기포형성을 제거합니다.
LC에 사용되는 용매는 따로 제조되어 판매되는거 아시나요?
용매 이름 옆에 (LC grade)라고 표기되어 있답니다!
일반 등급의 시약보다 가격도 조금 더 비싸답니다.ㅎㅎ
2-2. 검출기
디텍터란 무엇일까요? 검출기라고도 합니다.
detector column에서 분리된 시료가 일정한 간격으로 검출기를 통과할 때 시료의 존재 및 양을 일정한 규칙에 의해 전기적인 신호로 전환 |
쉽게 말해서 컬럼에 의해 분리된 성분들을 감지하는 장치입니다.
검출기의 종류에 따른 특성을 잘 알고 분석하고자하는 샘플에 따라 적합한 검출기를 선택하여야 합니다 !!!
검출기의 종류는 여러가지가 있는데 우리 한국식품정보원에는 UV-vis 검출기가 장착된 HPLC를 사용하고 있습니다.
UV-vis detector : 화합물이 빛을 흡수하는 성질을 이용하여 흡광도를 측정. 가장 많이 사용되는 검출기
그외에 아래와 같은 검출기 또한 있으니 참고바랍니다.
<LC에 사용되는 detector 검출기 종류> 1. UV-vis detector 2. PDA (PhotoDiode Array detector) 3. FLD (Fluorescene detector) 4. RID (Refractive Index detector) 5. ELSD (Evaporative Laser Scattering dtector) 6. MSD (Mass Spectrometer detector) |
HPLC 구성 장치에 대해서 좀 더 자세히 알고 싶으시면 한국식품정보원을 찾아주세요!
3. 컬럼 및 이동상 선정
컬럼과 이동상은 혼합성분을 각각의 단일 성분으로 분리시키는 아주 중요한 역할을 하는 구성품 입니다.
구성하고자하는 시료의 종류에 따라 컬럼의 크기, 충진재의 종류, 재질, 이동상의 종류 등이 매우 다양합니다.
높은 분리능으로 재현성 있는 결과를 나타내기 위해서는 적합한 컬럼과 용매를 선택하는것이 매우 중요합니다.
▼▽한국식품정보원이 보유한 C18 컬럼▼▽
우리 한국식품정보원에서는 Agilent 사의 C18 컬럼을 사용하여 표준품 및 샘플을 분석하고 있습니다.
한국식품정보원에서 HPLC 분석 기초 교육을 통해
분석하고자하는 시료에 맞는 컬럼을 선정하는 방법과 각 컬럼의 보관 및 세척 방법에 대해 자세히 배우실 수 있습니다.
HPLC 분석 기초 교육 중 이론 교육에 대한 맛보기!!를 말씀드렸어요~
정말 유용할 것 같지 않나요??
실습 교육은 어떤 식으로 진행되는지 다음시간에 알려드릴게요~^^
한국식품정보원 대전교육장에서 진행되는 HPLC 분석 교육에 관심있으신 분들께서는 아래 배너를 클릭해주세요!
가장 빠른 교육은 7/22-23 에 예정되어 있습니다.
기타 문의사항은 042-820-9000으로 전화 주세요 
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