1. 액체 크로마토그래피의 종류?
액체 크로마토그래피란, 액체 또는 고체를 고정상(컬럼, column)으로 하여 이 컬럼에 이동상으로써 액체를 통과시켜 분리시키는 법으로써,
1, 액체-액체 크로마토그래피(Liquid-Liquid Chromatography, LLC)
2, 액체-고체 크로마토그래피(Liquid-Solid Chromatography, LSC)
3, 물질을 분리시키는 기법의 차이에 의한 이온교환 크로마토그래피(Ion exchange Chromatography, IC)
4, 크기배제 크로마토그래피(Size Exclusion Chromatography, SEC)
등이 있다.
2.액체-고체 크로마토그래피?
액체-고체 크로마토그래피는 이동상이 액체이고 고정상이 고체인 흡착 크로마토그래피이다. 흡착제로 사용되는 것은 주로 실리카, 알루미나, 분자체, 다공성 유리 등이며 고정상인 흡착제의 극성이 높기 때문에 극성이 강한 시료는 흡착제와 작용을 일으켜 용출이 쉽게 되지 않으며 피크가 길게 나타난다.
3. 액체-액체 크로마토그래피
액체-액체 크로마토그래피는 시료성분이 이동상의 액체와 고정상의 액체 사이에서 분배 되는 분배 크로마토그래피이다. 고정상으로서 사용되는 액체가 반드시 용매일 필요는 없으며, 물이 고정상이고 유기용매가 이동상인 경우도 있다.
이동상과 고정상의 상호 작용의 강하기에 따라서 순상과 역상으로 나누어지며, 순상이란 고정상의 극성이 이동상의 극성 보다 높은 상태에서 시료의 분배가 되는 것을 말하며 역상이란 고정상의 극성이 이동상 보다 낮은 것을 말한다.
4. 액체-액체 크로마토그래피의 순상과 역상??
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구 분 |
순 상(Normal phase) |
역 상(Reverse phase) |
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고정상(컬럼)의 극성 |
높 음 |
낮 음 |
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이동상(용매)의 극성 |
낮거나 중간 |
중간 또는 높음 |
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시료성분의 용출순서 |
극성이 낮은 성분이빨리 용출된다 |
극성이 높은 성분이 빨리 용출된다 |
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이동상의 극성을 높인경우 시료의 용출 |
늦게 용출된다 (분석 시간이 길어진다) |
빨리 용출된다 |
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소요되는 분석시간 |
짧은 분석시간 |
긴 분석시간 |
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분석대상 시료 |
극성 시료 |
비 극성 시료 |
이동상과 고정상의 상관관계를 비교하여 시료에 따른 고정상의 극성을 순상 또는 역상을 선택하고, 적절한 이동상을 사용하여야만 성공적인 분석결과를 얻을 수 있다.
5. 이온교환 크로마토그래피?
이온교환 크로마토그래피는 합성 유기수지 또는 합성 무기수지를 사용하여 시료와 수지 사이의 이온 강도에 의하여 성분을 분리시키는 것으로서, 수지와 친화력에 있어 차이가 있으여 그 친화력의 차이를 이용하여 성분을 분리시킨다.
이동상은 이온교환이 일어나기에 적합한 완충액이어야 하며 여러 종류의 염류를 용해시킬 수 있어야 한다.
또한, 이동상인 용매의 적절한 이온강도에 의하여 시료의 분리시간을 조절할 수 있어야 한다.
6.크기배제 크로마토그래피
크기배제 크로마토그래피는 크기가 고르고 다공성이며 비이온성인 겔을 고정상으로 하여 분자 크기에 따라 물질을 분리하는 것이다. 크기가 작은 물질은 다공성을 지닌 고정상의 공간으로 들어가 다시 빠져 나오는데 시간이 걸리므로 용출시간이 오래 걸리고 크기가 큰 분자의 경우는 다공질의 공간에 들어갈 수 없으므로 이동상과 함께 빠르게 이동되어 용출시간이 짧게 걸린다. 따라서 용출되는 순서는 분자의 크기가 큰 물질이 빨리 용출되고 분자의 크기가 작은 물질은 늦게 용출된다.
분자량이 약 2,000 이상의 고분자물질을 분리하는데 사용되며 시료분자의 화학적인 성질 보다는 크기에 의하여 분리된다.