Measurement of Microbial Growth
세균증식을 측정하는 데에는 균수를 측정하는 경우와 균량을 측정하는 경우가 있다. 일정세균수와 일정배양조건에서는 균수와 균량이 비례한다. 그러나 일정세균배양조건을 좋게 하고 증식속도를 높이면 하나의 균이 크게 되므로 동일 균수에서도 배양조건이 좋으면 증식속도가 빠른 편이 크게 된다.
1. 균수의 측정법
가. 진균수의 측정
혈구계산판과 거의 유사한 Petroff-Hauser세균계산판을 이용하여, 깊이 0.02mm, 면적 1/400㎟의 게산실
(1/20,000 mm3) 내의 세균을 현미경으로 센다.
식염 등의 전해질에 세균을 분산시키고, 전류가 흐르는 가는 구멍을 통과시키면, 가느다란 구멍은 그 자체로 커다란
저항을 가지지만, 세균이 통과함에 따라, 세균 체적분만 전해액이 치환되어, 보다 저항이 증가하고, 세균 체적에
비례한 전압 펄스가 생긴다. 이 전압 펄스 크기와 수를 전기적으로 측정할 수 있는 Coulter counter를 사용하여 세
균균수를 측정한다.
나. 세균수 측정
획선도말법, 혼합희석 배양법, 멤브레인 필터법이 있으며, 집락형성능이 있는 균수를 세는 방법이다. 그러나 하나의 집락을 형성하는 최초의 군이 여러 개일 때에는 정확한 균수를 셀 수가 없으므로, 균종에 따라서는 정확한 수를 구
할 수 없다. 일반적으로 집락수의 신뢰도는 계수한 집락수에 따라 결정되므로, 집락수가 적은 평판을 여러장 만들
어서 집락수가 많게 되도록 한 장의 평판을 이용하는 편이 정밀도가 높게 된다. 물론 평판내의 집락수가 많으면,
집락은 중북이 되어 부정확하게 된다.
우선 시료를 희석함으로써 평판에 도포하는 것이지만, 1회 희석의 확률오차를 a％라하고, 그런 희석을 n회 한다면,
희석에 따른 오차는 a×√n이 되므로 희석 회수를 될 수 있는 한 적게 하여 실험의 정밀도를 높여야 한다.
무엇보다도 생균수는 배양 후 1∼2일 후에 알 수 있으므로, 예를 들면 2×108/ml의 균량으로 실험하였을 때에는
이 방법은 쓸모없다. 그 때에는 다음 균량측정법의 탁도법에 의하여, 탁도와 생균수와의 관계를 표준곡선으로 하여
그리면, 탁도에서 생균수를 예상할 수 있다. 그러나 표준곡선도 균주를 바꾸거나, 배지, 배양방법을 바꾸면, 쓸모
없게 된다.
2. 균량의 측정법
건조중량, 질소량, DNA량, RNA량, 단백질량, 배양액을 원심분리하여 침전시킨 균의 체적 등을 측정하는 방법이 있지만, 가장 편리한 방법은 광전광도계를 사용하여 탁도를 측정하는 방법이 있다. 이 방법에서는 물론 죽은 균도 둘어오게 된다. 탁도법은 세균이 R형 으로 clumping하거나, 색이 흡수가 있을 때에는 사용하지 않는다. 보통 완전배지에서는 600∼660 nm, 최소배지에서는 420∼560nm의 파장을 사용하여 착색의 영향을 적게 하는 동시에 감도가 좋은 파장을 선택한다
세균증식을 측정하는 데에는 균수를 측정하는 경우와 균량을 측정하는 경우가 있다. 일정세균수와 일정배양조건에서는 균수와 균량이 비례한다. 그러나 일정세균배양조건을 좋게 하고 증식속도를 높이면 하나의 균이 크게 되므로 동일 균수에서도 배양조건이 좋으면 증식속도가 빠른 편이 크게 된다.
1. 균수의 측정법
가. 진균수의 측정
혈구계산판과 거의 유사한 Petroff-Hauser세균계산판을 이용하여, 깊이 0.02mm, 면적 1/400㎟의 게산실
(1/20,000 mm3) 내의 세균을 현미경으로 센다.
식염 등의 전해질에 세균을 분산시키고, 전류가 흐르는 가는 구멍을 통과시키면, 가느다란 구멍은 그 자체로 커다란
저항을 가지지만, 세균이 통과함에 따라, 세균 체적분만 전해액이 치환되어, 보다 저항이 증가하고, 세균 체적에
비례한 전압 펄스가 생긴다. 이 전압 펄스 크기와 수를 전기적으로 측정할 수 있는 Coulter counter를 사용하여 세
균균수를 측정한다.
나. 세균수 측정
획선도말법, 혼합희석 배양법, 멤브레인 필터법이 있으며, 집락형성능이 있는 균수를 세는 방법이다. 그러나 하나의 집락을 형성하는 최초의 군이 여러 개일 때에는 정확한 균수를 셀 수가 없으므로, 균종에 따라서는 정확한 수를 구
할 수 없다. 일반적으로 집락수의 신뢰도는 계수한 집락수에 따라 결정되므로, 집락수가 적은 평판을 여러장 만들
어서 집락수가 많게 되도록 한 장의 평판을 이용하는 편이 정밀도가 높게 된다. 물론 평판내의 집락수가 많으면,
집락은 중북이 되어 부정확하게 된다.
우선 시료를 희석함으로써 평판에 도포하는 것이지만, 1회 희석의 확률오차를 a％라하고, 그런 희석을 n회 한다면,
희석에 따른 오차는 a×√n이 되므로 희석 회수를 될 수 있는 한 적게 하여 실험의 정밀도를 높여야 한다.
무엇보다도 생균수는 배양 후 1∼2일 후에 알 수 있으므로, 예를 들면 2×108/ml의 균량으로 실험하였을 때에는
이 방법은 쓸모없다. 그 때에는 다음 균량측정법의 탁도법에 의하여, 탁도와 생균수와의 관계를 표준곡선으로 하여
그리면, 탁도에서 생균수를 예상할 수 있다. 그러나 표준곡선도 균주를 바꾸거나, 배지, 배양방법을 바꾸면, 쓸모
없게 된다.
2. 균량의 측정법
건조중량, 질소량, DNA량, RNA량, 단백질량, 배양액을 원심분리하여 침전시킨 균의 체적 등을 측정하는 방법이 있지만, 가장 편리한 방법은 광전광도계를 사용하여 탁도를 측정하는 방법이 있다. 이 방법에서는 물론 죽은 균도 둘어오게 된다. 탁도법은 세균이 R형 으로 clumping하거나, 색이 흡수가 있을 때에는 사용하지 않는다. 보통 완전배지에서는 600∼660 nm, 최소배지에서는 420∼560nm의 파장을 사용하여 착색의 영향을 적게 하는 동시에 감도가 좋은 파장을 선택한다
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