실험] 박테리아에서 DNA 추출하는 방법
재료
완충용액, 박테리아, EDTA, SDS(sodium dodecyl sulfate), 페놀(석탄산)
방법
1. 큰 비커에 완충용액을 넣고 체온 정도의 온도에서 이틀 정도 덥힌다. 그리고 박테리아를 약간(약 10억개 정도) 넣는다.
2. 이 혼합물 중 일부를 시험관에 넣고 원심분리기에서 분당 8000(rpm)의 속도로 30분 동안 회전시킨다. 그러면 시험관에는 노란 회색을 띠는 뭉쳐진 박테리아 세포가 바닥에 남고 투명한 액체가 상층에 형성된다.
3. 대부분의 액체를 버린다. 뭉쳐진 덩어리와 남아 있는 액체를 shaker에 넣고 흔들어 세포를 현탁시킨다.
4. 한두 방울의 EDTA와 SDS를 넣는다. 이 두 화학 약품은 박테리아의 세포벽을 깨서 모든 세포 내용물이 용출되도록 하는 역할을 한다. 즉. EDTA는 마그네슘 이온을 세포벽에서 제거해 벽을 약하게 만들고 SDS 세포벽에서 지방 성분을 녹여낸다. 약 30분이 지나면 계란 흰자 같은 투명하고 끈적이는 액체를 얻게 된다.
5. 이 끈적이는 혼합물에는 헝클어진 긴 DNA 분자 가닥이 들어 있다. 또 단백질과 그 밖의 세포 내부에서 나온 물질도 들어 있다. 단백질을 없에려면 약간의 페놀(석탄산)을 넣고 시험관을 가볍게 치면서 앞뒤로 흔들면 된다. 페놀 용액은 DNA가닥을 자르지 않은 채 섞이게 된다. 단백질은 용액에서 분리되어 시험관의 바닥으로 천천히 가라앉으며 갈색 곤죽처럼 된다.
6. 이 곤죽을 다시 원심분리기에 넣고 30분간 회전 시킨다. 그러면 투명한 페놀의 얇은 층이 맨 바닥에 깔리고 탁한 흰색의 단백질층이 그 위에, 그리고 DNA를 갖고 있는 투명한 액체가 맨 위에 있게 된다.
7. 끝이 구부러진 가는 피펫을 이용하여 조심스럽게 한 방울씩 DNA를 꺼낸 후 깨끗한 시험관에 옮긴다
재료
완충용액, 박테리아, EDTA, SDS(sodium dodecyl sulfate), 페놀(석탄산)
방법
1. 큰 비커에 완충용액을 넣고 체온 정도의 온도에서 이틀 정도 덥힌다. 그리고 박테리아를 약간(약 10억개 정도) 넣는다.
2. 이 혼합물 중 일부를 시험관에 넣고 원심분리기에서 분당 8000(rpm)의 속도로 30분 동안 회전시킨다. 그러면 시험관에는 노란 회색을 띠는 뭉쳐진 박테리아 세포가 바닥에 남고 투명한 액체가 상층에 형성된다.
3. 대부분의 액체를 버린다. 뭉쳐진 덩어리와 남아 있는 액체를 shaker에 넣고 흔들어 세포를 현탁시킨다.
4. 한두 방울의 EDTA와 SDS를 넣는다. 이 두 화학 약품은 박테리아의 세포벽을 깨서 모든 세포 내용물이 용출되도록 하는 역할을 한다. 즉. EDTA는 마그네슘 이온을 세포벽에서 제거해 벽을 약하게 만들고 SDS 세포벽에서 지방 성분을 녹여낸다. 약 30분이 지나면 계란 흰자 같은 투명하고 끈적이는 액체를 얻게 된다.
5. 이 끈적이는 혼합물에는 헝클어진 긴 DNA 분자 가닥이 들어 있다. 또 단백질과 그 밖의 세포 내부에서 나온 물질도 들어 있다. 단백질을 없에려면 약간의 페놀(석탄산)을 넣고 시험관을 가볍게 치면서 앞뒤로 흔들면 된다. 페놀 용액은 DNA가닥을 자르지 않은 채 섞이게 된다. 단백질은 용액에서 분리되어 시험관의 바닥으로 천천히 가라앉으며 갈색 곤죽처럼 된다.
6. 이 곤죽을 다시 원심분리기에 넣고 30분간 회전 시킨다. 그러면 투명한 페놀의 얇은 층이 맨 바닥에 깔리고 탁한 흰색의 단백질층이 그 위에, 그리고 DNA를 갖고 있는 투명한 액체가 맨 위에 있게 된다.
7. 끝이 구부러진 가는 피펫을 이용하여 조심스럽게 한 방울씩 DNA를 꺼낸 후 깨끗한 시험관에 옮긴다
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